操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
我司常期代理ATCC Acris abcam cst Biorbyt santa Novus sigma lifespan NEB roche ABI R&D millipore BD Qiagen Cayman Jackson Life GeneTex Bio-Rad DSHB tocris peprotech 等品牌；部分產(chǎn)品現(xiàn)貨，超低比價(jià)，貨期短，價(jià)格優(yōu)，售后齊全。
產(chǎn)品名稱 | |
規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 |
貨號(hào) | BJ-X97290 |
商品屬性：
名稱 小鼠冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞 2.組織來源：冠狀動(dòng)脈 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡介： 小鼠冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞分離自冠狀動(dòng)脈組織；冠狀動(dòng)脈是供給心臟血液的動(dòng)脈，起于主動(dòng)脈根部，分左右兩支，行于心臟表面。采用Schlesinger等的分類原則，將冠狀動(dòng)脈的分布分為三型：右優(yōu)勢(shì)型、均衡型、左優(yōu)勢(shì)型。左右冠狀動(dòng)脈是升主動(dòng)脈的第一對(duì)分支。左冠狀動(dòng)脈為一短干，發(fā)自左主動(dòng)脈竇，經(jīng)肺動(dòng)脈起始部和左心耳之間，沿冠狀溝向左前方行后，立即分為前室間支和旋支。前室間支沿前室間溝下行，旋支繞過心尖切跡至心的膈面與右冠狀動(dòng)脈的后室間支相吻合。冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞呈單層扁平分布，是一薄層的專門上皮細(xì)胞，它形成冠狀動(dòng)脈的內(nèi)壁，是血管管腔內(nèi)血液及其他血管壁（單層鱗狀上皮）的接口。內(nèi)皮細(xì)胞是沿著整個(gè)循環(huán)系統(tǒng)，由心臟直至最小的微血管。 5.方法簡介： ()實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞采用混合酶短暫消化后組織貼塊、結(jié)合內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測(cè)： ()實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 包被條件PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%） 培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號(hào)CM-M081 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)內(nèi)皮細(xì)胞樣 傳代特性可傳2-3代 消化液0.25% 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號(hào)12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二. 細(xì)胞處理:
1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
人細(xì)胞因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子1(SOCS-1)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
大鼠P53(P53)免疫試劑盒*直銷
Beta Lactams(β-內(nèi)酰胺)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
大豆酪蛋白消化物瓊脂培養(yǎng)基USP 英文名稱：Tryptose Soya Broth 產(chǎn)品規(guī)格：250g
尿素 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：20支
小鼠轉(zhuǎn)化生長因子α(TGF-α)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
小鼠抗平滑肌抗體(ASMA)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
人組織蛋白K(cath-K)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
人胎球蛋白A(Fetuin A)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝?
小鼠冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞Bacillus cereus 蠟狀芽孢桿探針法熒光定量PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周SARS S-protein 抗表面S蛋白抗體 規(guī)格: 0.1mlMCM2 微小染色體維持缺陷蛋白2抗體 規(guī)格: 0.1ml
Retinervus luffae fructus絲瓜絡(luò)染料法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周MGMT O6甲基DNA甲基轉(zhuǎn)移抗體 規(guī)格: 0.2mlLH 人促黃體生成素抗體 規(guī)格: 0.1ml
Salmonella kentucky肯塔基沙門氏LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周Donkey Anti-Goat IgG/Cy3 Cy3標(biāo)記的驢抗羊IgG 規(guī)格: 0.1mlPhospho-Cyclin B1(Ser133) 磷酸化周期素B1抗體 規(guī)格: 0.1ml
Avian Leukosis Virus(ALV)禽白血病病毒E亞群探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周Synaptopodin 突觸極蛋白synaptopodin抗體 規(guī)格: 0.1mlRAD50 DNA修復(fù)蛋白R(shí)ad50抗體 規(guī)格: 0.2ml
Herba siegesbeckiae豨薟草染料法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周DIS3L2 有絲分裂控制蛋白樣DIS3L2抗體 規(guī)格: 0.2mlTbx21/T-bet T細(xì)胞介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子Tbx21抗體 規(guī)格: 0.1ml
鵝源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒 種源性檢測(cè)/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周Rabbit anti-MG IgG/PE PE標(biāo)記的兔抗爪沙鼠IgG 規(guī)格: 0.1mlNonylphenol 壬基酚抗體 規(guī)格: 1ml
Prevotella spp.普雷沃屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周CDK10 周期素依賴性激10 規(guī)格: 0.2mlRabbit Anti-pig IgG/PE-Cy7 PE-Cy7標(biāo)記的兔抗豬IgG 規(guī)格: 0.1ml
Ovulinia azaleae杜鵑花枯萎病PCR試劑盒 植物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周C21orf128 21號(hào)染色體開放閱讀框128抗體 規(guī)格: 0.2mlBAAT 鏈脂肪酸酰基輔A水解抗體 規(guī)格: 0.2ml
Ramulus uncariae cum uncis鉤藤PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周PLDL1/PLCE 磷脂C1樣蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlSENP5 泛素相關(guān)修飾蛋白特異性蛋白5抗體 規(guī)格: 0.2ml
Human Immunodeficiency Virus 1(HIV-1M-K)人免疫缺陷病毒1型M群K型RT-LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周Phospho-Lyn (Tyr497) 磷酸化膜相關(guān)蛋白酪激Lyn抗體 規(guī)格: 0.1mlCDK6 周期素依賴性激6抗體 規(guī)格: 0.1ml
