天根DNA純化試劑盒-DP205產(chǎn)品簡(jiǎn)介

  天根DNA純化試劑盒-DP205試劑盒采用的離心吸附柱純化酶切、PCR等反應(yīng)溶液中的DNA片段，同時(shí)除去蛋 白質(zhì)、其它有機(jī)化合物、無(wú)機(jī)鹽離子及寡核苷酸引物等雜質(zhì)，回收100 bp-10 kb DNA片段， 回收率可達(dá)80%以上。每個(gè)離心吸附柱每次可吸附的DNA量為20 μg。 使用本試劑盒回收的DNA可適用于各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR、測(cè)序、文庫(kù)篩選、 連接和轉(zhuǎn)化等實(shí)驗(yàn)。

 產(chǎn)品特點(diǎn) 快速：整個(gè)操作過(guò)程只需十幾分鐘，節(jié)省時(shí)間。

 多樣：可以回收單鏈、雙鏈DNA片段以及環(huán)狀質(zhì)粒DNA。

 高效：離心柱和緩沖液可大量回收到高純度目的DNA。

1．本試劑盒適用于無(wú)選擇性的回收溶液中所有DNA片段（可去除50 bp以下的小片段），如 需選擇性回收特定片段，同時(shí)去除其他不同大小片段，請(qǐng)選擇膠回收試劑盒。

2．洗脫緩沖液加量應(yīng)根據(jù)回收前DNA量來(lái)決定：如回收前DNA只有1-5 μg左右，則應(yīng)選用 超薄型離心柱，加20-50 μl洗脫緩沖液；回收前為5-20 μg左右的DNA，應(yīng)選用普通型離 心柱，加30-100 μl洗脫緩沖液；如回收前有20-30 μg左右DNA，則應(yīng)選用大量型離心 柱，加50-300 μl洗脫緩沖液。

3．回收率與初始DNA量和洗脫體積有關(guān)，初始量越少、洗脫體積越少，回收率越低。

4．對(duì)于10 kb的DNA片段可以適當(dāng)?shù)脑黾游胶拖疵摰臅r(shí)間

5．平衡液BL的加入能夠改善吸附柱的吸附能力并提高吸附柱的均一性和穩(wěn)定性，消除高溫 /潮濕或其他不良環(huán)境因素對(duì)吸附柱造成的影響。使用前請(qǐng)先檢查平衡液BL是否出現(xiàn)渾 濁，如有混濁現(xiàn)象，可在37℃水浴中加熱幾分鐘，即可恢復(fù)澄清。

6．用平衡液處理過(guò)的柱子應(yīng)當(dāng)天使用，放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)影響效果。 

注意事項(xiàng) 請(qǐng)務(wù)必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項(xiàng)

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天根DNA純化試劑盒-DP205操作步驟

 使用前請(qǐng)?jiān)谄匆篜W中加入無(wú)水乙醇，加入體積請(qǐng)參照瓶上的標(biāo)簽。所有離心步驟均為使用臺(tái)式離心機(jī)在室溫下離心。

1. 柱平衡步驟：向吸附柱CB3中（吸附柱放入收集管中）加入500 μl的平衡液BL，12,000 rpm (~13,400×g) 離心1 min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。（請(qǐng)使用 當(dāng)天處理過(guò)的柱子）

2. 估計(jì)PCR反應(yīng)液或酶切反應(yīng)液的體積，向其中加入5倍體積的結(jié)合液PB，充分混勻（無(wú) 需去除石蠟油或礦物油）。 注意：如PCR反應(yīng)體系為100 μl（不包括石蠟油體積）, 則加入500 μl結(jié)合液PB。

3. 將上一步所得溶液加入一個(gè)吸附柱CB3中（吸附柱放入收集管中），室溫放置2 min， 12,000 rpm(~13,400×g)離心30-60 sec，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CB3放入收集 管中。 注意：吸附柱容積為800 μl，若樣品體積大于800 μl可分批加入。

4. 向吸附柱CB3中加入600 μl漂洗液PW（使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇），12,000 rpm (~13,400×g)離心30-60 sec，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CB3放入收集管中。 注意：如果純化的DNA是用于鹽敏感的實(shí)驗(yàn)，例如平末端連接實(shí)驗(yàn)或直接測(cè)序，建議PW 加入后靜置2-5 min再離心。

5. 重復(fù)操作步驟4。

6. 將離心吸附柱CB3放回收集管中，12,000 rpm(~13,400×g)離心2 min，盡量除去漂洗 液。將吸附柱置于室溫放置數(shù)分鐘，地晾干，以防止殘留的漂洗液影響下一步的實(shí) 驗(yàn)。 注意：漂洗液中乙醇的殘留會(huì)影響后續(xù)的酶反應(yīng)（酶切、PCR等）實(shí)驗(yàn)

7. 取出吸附柱CB3放入一個(gè)干凈的離心管中，向吸附膜中間位置懸空滴加適量洗脫緩沖液 EB，室溫放置2 min。12,000 rpm(~13,400×g)離心2 min，收集DNA溶液。 注意：洗脫液的體積不應(yīng)少于50 μl，體積過(guò)少會(huì)影響回收的效率。洗脫液的pH值對(duì)于洗 脫效率有很大影響。若后續(xù)做測(cè)序，需使用ddH2O做洗脫液，并保證其pH值在7.0-8.5范 圍內(nèi)，pH值低于7.0會(huì)降低洗脫效率；且DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃，以防DNA降解。DNA 也可以用緩沖液(10 mM Tris-Cl, pH8.0) 洗脫。為了提高DNA的回收量，可將離心得到的 溶液重新加回離心吸附柱中，再次離心。

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 DNA濃度及純度檢測(cè) 回收得到的DNA片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)檢測(cè)濃度與純度。 DNA應(yīng)在OD260處有顯著吸收峰，OD260值為1相當(dāng)于大約50 μg/ml雙鏈DNA、40 μg/ml 單鏈DNA。 OD260/OD280比值應(yīng)為1.7-1.9，如果洗脫時(shí)不使用洗脫緩沖液，而使用ddH2O，比值會(huì)偏 低，因?yàn)閜H值和離子存在會(huì)影響光吸收值，但并不表示純度低。