產(chǎn)品名稱 | 原代人肝動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞 | 英文名稱 | Human Hepatic Artery Smooth Muscle Cells |
規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 貨號(hào) | GOY-01X0860 |
組織來源 | 肝動(dòng)脈組織 | 細(xì)胞形態(tài) | 成纖維細(xì)胞樣 |
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)最佳
消化液 0.25%yi蛋白酶
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
人肝動(dòng)脈平滑肌分離自肝動(dòng)脈組織；在胚胎期，肝臟有3條動(dòng)脈供血，分別來源于胃左動(dòng)脈、腹腔動(dòng)脈和腸系膜上動(dòng)脈，這3條動(dòng)脈分別肝臟的不同部位。出生后，一般保留一條動(dòng)脈，大部分為起源于腹腔動(dòng)脈的動(dòng)脈，由其分出左、右肝動(dòng)脈供應(yīng)左、右半肝。偶爾也可見起源于胃左動(dòng)脈的動(dòng)脈或起源于腸系膜上動(dòng)脈的動(dòng)脈。但也有2條動(dòng)脈并存的情況，如起源于腹腔動(dòng)脈和起源于胃左動(dòng)脈（25%），起源于腹腔動(dòng)脈和起源于腸系臘上動(dòng)脈（10%），而起源于胃左動(dòng)脈和起源于腸系膜上動(dòng)脈的2條動(dòng)脈同時(shí)存在的情況比較少見。此外，還有5%像胚胎期一樣，3條動(dòng)脈同時(shí)存在。這種起源于腹腔動(dòng)脈以外的肝動(dòng)脈稱為迷走肝動(dòng)脈，如果肝臟沒有起源于腹腔動(dòng)脈的動(dòng)脈供血時(shí)，此種異位起源的肝動(dòng)脈稱替代動(dòng)脈，如果在常見肝動(dòng)脈類型外，還有一支這種異位起始的動(dòng)脈肝臟的一部分血流，這種肝動(dòng)脈稱副肝動(dòng)脈。肝動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞是肝動(dòng)脈的重要結(jié)構(gòu)細(xì)胞之一，在機(jī)體的正常生理過程中發(fā)揮著重要作用。肝動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細(xì)胞貼壁伸展，細(xì)胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細(xì)胞匯合，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長，高低起伏；細(xì)胞密度低時(shí)，常交織成網(wǎng)狀；密度高時(shí)，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細(xì)胞生長較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長特點(diǎn)。血管平滑肌細(xì)胞的加速生長潛能是血管疾病進(jìn)展的關(guān)鍵因素，最新研究表明血管平滑肌細(xì)胞表達(dá)的ICAM-1和VCAM-1能促進(jìn)血管壁的炎癥反應(yīng)，并且與血管疾病的發(fā)展及穩(wěn)定性有關(guān)。
方法簡(jiǎn)介：
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人肝動(dòng)脈平滑肌采用yi蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)：
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人肝動(dòng)脈平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
1) 將5-10d的乳鼠浸泡入75%乙醇中，移入生物安全柜，
2) 從胸部解剖乳鼠，取出雙肺置于預(yù)冷的PBS中，盡可能的除去結(jié)締組織等，
3) 取肺邊緣部分，剪碎，將組織塊移入T25培養(yǎng)瓶中，倒置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中，
4) 2h后，培養(yǎng)瓶中注入2 mL內(nèi)皮培養(yǎng)基，小心將培養(yǎng)瓶正置于培養(yǎng)箱，確保組織塊不會(huì)飄起來，
5) 每3d換液2mL，待細(xì)胞從組織塊中爬出來后，隔2d換液，待細(xì)胞融合達(dá)到60-70%左右時(shí)，去除組織塊，將肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞重新鋪瓶。
人頸動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞 | 人頸靜脈球瘤細(xì)胞 |
人口腔成纖維細(xì)胞 | 羅湖病毒（TiLV）RNA檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針法） |
人口腔黏膜上皮細(xì)胞 | 對(duì)蝦血細(xì)胞虹彩病毒（SHIV）檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針法） |
人類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細(xì)胞 | 包納米蟲（Bona）檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針法） |
人淋巴管成纖維細(xì)胞 | 鯉浮腫病毒(CEV)檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針法） |
人淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞 | 折光馬爾太蟲檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針法） |
人卵巢成纖維細(xì)胞 | 派琴蟲檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針法） |
人慢性髓系白血病細(xì)胞 | 細(xì)菌總數(shù)/弧菌總數(shù)檢測(cè)試劑盒（PCR熒光探針法） |
人卵巢囊腫細(xì)胞 | 流行性潰瘍綜合癥（EUS）檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針法） |
人卵巢微血管內(nèi)皮細(xì)胞 | 真鯛虹彩病毒（RSIV）檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針法） |
人脈絡(luò)膜成纖維細(xì)胞 | 流行性造血器官壞死病病毒（EHNV）檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針法） |
人脈絡(luò)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞 | 病毒性神經(jīng)壞死病毒（VNNV）RNA檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針法） |
人毛囊成纖維細(xì)胞 | 原代人肝動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞傳染性胰臟壞死病病毒（IPNV）RNA檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針法） |
人毛囊干細(xì)胞 | 病毒性出血性敗血癥病毒（VHSV）RNA檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針法） |
人偏肺病毒檢測(cè)試劑盒 | 草魚出血病III型病毒（GCRV III）RNA檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針法） |
1、您收到細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作：
取出T-25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置4-6小時(shí)或過夜，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)，然后換用新鮮培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進(jìn)行傳代。
2、細(xì)胞傳代：
1）細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí)，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2）添加0.125%消化液約2ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1500rpm/min，離心5min；
3）棄上清，沉淀細(xì)胞用12ml培養(yǎng)基重懸，然后按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代，放入37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4）待細(xì)胞貼壁后，觀察培養(yǎng)結(jié)果，之后進(jìn)行換液培養(yǎng)或傳代。
3、細(xì)胞凍存：
1）細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí)，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2）添加0.125%消化液約2ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，再加入培養(yǎng)液終止消化，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1500rpm/min，離心5min；
3）用適當(dāng)量的凍存液（基礎(chǔ)培養(yǎng)基：FBS：DMSO=7:2:1）重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中；
4）先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h后轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長期保存。
4、細(xì)胞復(fù)蘇：
1）從液氮中取出細(xì)胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具）， 快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結(jié)晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；
2）將凍存管中的細(xì)胞移至15ml無菌離心管中，滴加入培養(yǎng)液5ml混勻細(xì)胞，然后將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至適當(dāng)面積大小的培養(yǎng)皿中；
3）放置于37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4）第二天，換用新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
