產(chǎn)品名稱 | 原代大鼠肺成纖維細胞 | 英文名稱 | Rat Lung Fibroblast Cells |
規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 貨號 | GOY-01X0706 |
組織來源 | 肺組織 | 細胞形態(tài) | 成纖維細胞樣 |
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 成纖維細胞樣
傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)最佳
消化液 0.25%yi蛋白酶
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細胞簡介：
大鼠肺成纖維分離自肺組織；肺是機體的呼吸器官，位于胸腔，左右各一，覆蓋于心之上。肺有分葉，左二右三，共五葉。肺經(jīng)肺系（指氣管、支氣管等）與喉、鼻相連，故稱喉為肺之門戶，鼻為肺之外竅。成纖維細胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質(zhì)細胞分化而來；成纖維細胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現(xiàn)跟纖維細胞的互相轉(zhuǎn)化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的肺成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細胞基本貼壁wan全，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質(zhì)透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。肺成纖維細胞在生理條件下的主要功能包括：構(gòu)造和維持肺器官的正常形態(tài)，合成和釋放細胞外基質(zhì)以及組織損傷后及時大量聚集修復(fù)損傷組織。
方法簡介：
公司實驗室分離的大鼠肺成纖維采用yi蛋白酶-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測：
公司實驗室分離的大鼠肺成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
1、您收到細胞后，請按照以下方法進行操作：
取出T-25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置4-6小時或過夜，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)，然后換用新鮮培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進行傳代。
2、細胞傳代：
1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；
2）添加0.125%消化液約2ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1500rpm/min，離心5min；
3）棄上清，沉淀細胞用12ml培養(yǎng)基重懸，然后按1:2比例進行分瓶傳代，放入37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4）待細胞貼壁后，觀察培養(yǎng)結(jié)果，之后進行換液培養(yǎng)或傳代。
3、細胞凍存：
1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；
2）添加0.125%消化液約2ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后輕輕吹打細胞使之脫落，再加入培養(yǎng)液終止消化，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1500rpm/min，離心5min；
3）用適當(dāng)量的凍存液（基礎(chǔ)培養(yǎng)基：FBS：DMSO=7:2:1）重懸細胞，并放置于凍存管中；
4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h后轉(zhuǎn)入液氮中進行長期保存。
4、細胞復(fù)蘇：
1）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具）， 快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結(jié)晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；
2）將凍存管中的細胞移至15ml無菌離心管中，滴加入培養(yǎng)液5ml混勻細胞，然后將細胞懸液轉(zhuǎn)移至適當(dāng)面積大小的培養(yǎng)皿中；
3）放置于37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4）第二天，換用新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
小鼠雜交瘤細胞；Calcyclin | 小鼠雜交瘤細胞；Calreticulin |
小鼠雜交瘤細胞；cAMP | 肝片吸蟲PCR檢測試劑盒 |
小鼠雜交瘤細胞；CD10 | 擬片形吸蟲PCR檢測試劑盒 |
小鼠雜交瘤細胞；CD14 | 貓免疫缺陷病毒PCR檢測試劑盒 |
小鼠雜交瘤細胞；CD3 | 貓杯狀病毒PCR檢測試劑盒 |
小鼠雜交瘤細胞；CD20 | 貓白血病毒PCR檢測試劑盒 |
小鼠雜交瘤細胞；CANX | 貓細小病毒PCR檢測試劑盒 |
鯽魚腦星形膠質(zhì)細胞系；CAA | 費蘭杜病毒PCR檢測試劑盒 |
小鼠雜交瘤細胞；CD31 | 大片吸蟲PCR檢測試劑盒 |
小鼠雜交瘤細胞；CD8 | 皮炎外瓶霉PCR檢測試劑盒 |
小鼠雜交瘤細胞；CD4 | 闊盤吸蟲通用PCR檢測試劑盒 |
小鼠雜交瘤細胞；CHK1 | 胰闊圓盤吸蟲PCR檢測試劑盒 |
小鼠雜交瘤細胞；Clenbuterol | 原代大鼠肺成纖維細胞羊闊盤吸蟲PCR檢測試劑盒 |
小鼠雜交瘤細胞；C-Kit | 大腸桿菌通用PCR檢測試劑盒 |
勐海棒狀病毒檢測試劑盒 | 超廣譜內(nèi)酰胺酶肺炎克雷伯菌PCR檢測試劑盒 |
1) 將5-10d的乳鼠浸泡入75%乙醇中，移入生物安全柜，
2) 從胸部解剖乳鼠，取出雙肺置于預(yù)冷的PBS中，盡可能的除去結(jié)締組織等，
3) 取肺邊緣部分，剪碎，將組織塊移入T25培養(yǎng)瓶中，倒置于細胞培養(yǎng)箱中，
4) 2h后，培養(yǎng)瓶中注入2 mL內(nèi)皮培養(yǎng)基，小心將培養(yǎng)瓶正置于培養(yǎng)箱，確保組織塊不會飄起來，
5) 每3d換液2mL，待細胞從組織塊中爬出來后，隔2d換液，待細胞融合達到60-70%左右時，去除組織塊，將肺微血管內(nèi)皮細胞重新鋪瓶。
