Claycomb Medium培養(yǎng)基
產(chǎn)品介紹:
產(chǎn)品介紹
HL-1 Medium不含L-谷an酰an,液體,無菌過濾,適合細(xì)胞培養(yǎng)。
Claycomb培養(yǎng)基專用于培養(yǎng)小鼠心肌細(xì)胞生長(zhǎng)。HL-1是第一個(gè)能夠在 體外維持分化心肌細(xì)胞表型和收縮活性的細(xì)胞系。HL-1細(xì)胞系可用于研究心肌梗塞后的心肌細(xì)胞肥大、測(cè)試新型心臟治療藥物和療法、生產(chǎn)高水平心肌蛋白以及研究成熟心肌細(xì)胞特異性基因。補(bǔ)充100 μM去甲腎上腺su、10%胎牛血清(FBS)和4mM L-谷an酰an的Claycomb培養(yǎng)基,將能夠維持HL-1細(xì)胞系和成熟心肌細(xì)胞的行為。在光學(xué)顯微鏡下觀察HL-1細(xì)胞時(shí),可以觀察到細(xì)胞個(gè)體和群體的收縮隨心肌細(xì)胞逐漸融合而變得更加頻繁。
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規(guī)格 | 500mL | 保存條件 | -20℃、避光 |
貨號(hào) | GOY-XP5148 | 用途 | 僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將組織剪成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
運(yùn)輸和保存:
運(yùn)輸:放置于含有生物冰袋的保溫箱中低溫運(yùn)輸
保存方法:按照對(duì)應(yīng)保存條件保存12個(gè)月,配置好的培養(yǎng)基2℃~8℃,保存2個(gè)月;
質(zhì)量控制:
注意事項(xiàng):
1、收到產(chǎn)品請(qǐng)先檢查包裝是否完好,如有破損,漏液、渾濁等現(xiàn)象請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系我們,培養(yǎng)基凍融后,可能會(huì)有少量絮狀物析出,不影響產(chǎn)品正常使用。
2、請(qǐng)仔細(xì)閱讀產(chǎn)品說明書,了解產(chǎn)品使用方法、保存方式、有效期等信息,若因操作失誤,保存不當(dāng)而導(dǎo)致產(chǎn)品出現(xiàn)污染等問題的,責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。
3、本產(chǎn)品僅能用于科研,培養(yǎng)基中的一些組分對(duì)人體有較低的危害性,如有接觸立即用大量清水沖洗即可。
培養(yǎng)操作:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,細(xì)胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細(xì)胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液,注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
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