【產品名稱】
通用名稱：大腸桿菌O157:H7核酸快速檢測試劑盒
英文名稱：Rapid Detection kit for E. coli O157: H7
【包裝規(guī)格】24測試/盒
【產品編號】KJD09L
【產品簡介】
本試劑盒基于環(huán)介導的恒溫擴增技術(Loop-mediated isothermal amplification，LAMP)，用于食品中大腸桿菌O157:H7的快速檢測，可借助顯色指示劑直接判讀結果。
【檢測原理】
利用兩對特殊引物和具有鏈置換活性的Bst DNA聚合酶，使模板兩端引物結合處循環(huán)出現環(huán)狀單鏈結構，引物順利與模板結合并進行鏈置換擴增反應，實現在恒溫條件下(60-65℃)進行連續(xù)快速擴增。反應加入顯色指示劑，陰陽性結果顯色差異顯著，可直接通過顏色變化判讀結果。
【產品特點】
1. 快速簡便：將酶、引物等反應組分混勻后進行干粉化處理，增加試劑穩(wěn)定性，使用時減少溶液配制步驟，更為便捷，整個檢測反應可在1 h內完成；
2. 特異性高：利用靶基因序列上的多個獨立區(qū)域設計多條引物，保證擴增反應的高度特異性;
3. 靈敏度高：檢驗限達到29 CFU/Test；
4. 判讀簡單：反應前加入顯色指示劑，反應后通過肉眼觀察反應液顏色變化或者經熒光監(jiān)測儀器跟蹤熒光圖譜的變化判讀結果，直觀方便，且可有效避免反應后開蓋造成的氣溶膠污染。
【產品組分】
組分名稱 規(guī)格×數量
檢測試劑（凍干） 3排× 8管
復溶液 650 μL × 1管、
陽性對照（凍干） 1管
陰性對照（凍干） 1管
裂解液 1 mL × 1管
顯色指示劑 80 μL×1管
超純水 1 mL×1管
說明書1份
2~8℃條件下儲存，有效期為12個月、
【適用儀器】
1. PCR儀器或金屬浴恒溫器，如果檢測樣品為DNA樣品，水浴鍋即可。
2. 高速離心機，樣品的前處理需要用高速離心機做分離。
【樣品富集】
1. 樣品前處理：取25g待檢樣品置于225 mL mEC肉湯中，前增菌10-12 h，對增菌液中的菌體富集用于LAMP快速檢測。
2. 適用樣品類型：增菌液或者可疑菌落樣品。
3. 待測樣品存放：粗提的待檢DNA樣品保存于-4~0℃，不應該超過24 h;利用試劑盒提取的DNA樣品可在-20℃長期保存，但應避免反復凍融。
【使用指南】
1. 樣品前處理
A. 樣品增菌液模板DNA的制備：
a) 在檢測食品中大腸桿菌O157:H7時，吸增菌液1 mL到1.5 mL規(guī)格的無菌離心管中，6000 r/min離心5 min，棄上清;
b) 加入30 μL裂解液，充分懸浮菌體，輕彈管壁消除氣泡，99℃加熱10 min。
c) 12000 r/min離心15 min，上清即為粗提的DNA，可轉移至0.2 mL無菌離心管中，在-20℃下可長期保存。
B. 可疑菌落模板DNA的制備：
挑取可疑菌落，懸浮到含30 μL裂解液的無菌離心管中，后按照上述步驟b)、c)操作。
2. 陰、陽性對照和干粉試劑復溶
A. 陰、陽性對照復溶
使用時，加入80 μL超純水至陽性對照和陰性對照凍干粉中，待溶解后混勻，-20℃存儲待用。
B. 干粉試劑復溶
取出凍干粉試劑，按照需求剪取n個檢測試劑管(n=待檢測樣品數+1管陽性對照+1管陰性對照)，每管加入20 μL復溶液，溶解后待用。
1. 擴增反應
A. 打開能夠提供恒溫條件的儀器，設置到64℃待用;
B. 向上述已加入復溶液的n個反應管中各加入顯色指示劑2.5 μL；
C. 向上述已加入復溶液的n個反應管中分別加入待測樣品核酸、陰性對照、陽性對照各2.5 μL，蓋緊蓋子;
D. 將所有的反應管置于恒溫儀器中，反應50 min。
2. 結果判讀
反應結束后，建議在自然光線充足的環(huán)境條件下，將樣品置于白色背景下觀察結果，陰性對照檢測試劑管呈淡橙色，陽性對照檢測試劑管呈熒光綠，待測樣品反應管以此作為對照進行判讀，若陰陽對照反應管任一結果與上述情況不符，則本次檢測結果無效，應重新檢測或與產品技術支持聯(lián)系。
【注意事項】
1. 檢測空間應嚴格分區(qū)操作，在空間條件允許情況下，試劑配置區(qū)用于配置反應所需要的所有試劑;樣品前處理區(qū)用于待測樣品的核酸提取和模板的加入;擴增觀察區(qū)用于反應進行和結果判讀。各區(qū)內空間獨立，試驗用品專用，避免交叉污染。另外，樣品處理區(qū)建議配備超凈工作臺，并且所有步驟嚴格按照說明書的要求進行。
2. 檢測過程中建議穿潔凈工作服，帶一次性手套，使用的槍頭需提前滅菌。
3. 干粉檢測試劑在使用前低速離心，確保所有的干粉沉在管底，加入復溶液后盡量避免產生氣泡，反應前檢查反應管是否蓋緊，避免泄露造成污染。
4. 陽性對照可能會作為污染源，污染其他試劑和待檢樣品，導致出現假陽性結果，在加樣過程中建議最后加入陽性對照反應管。
5. 使用顯色指示劑時，在反應結束后切忌開蓋，以防氣溶膠污染。
6. 本試劑盒僅用于食品和環(huán)境中樣品的檢測。
本試劑盒是基于核酸的分子檢測，因此并 非只能檢出大腸桿菌O157：H7活菌，判定結果有時會與傳統(tǒng)培養(yǎng)法不同，如需辨明活菌樣品存在，請用傳統(tǒng)微生物檢驗方法進行確證。
7. 試劑盒中反應管材質為聚丙烯，包裝盒材質是紙，使用完畢廢棄時按照醫(yī)療廢棄物相關規(guī)定處理，由使用者自行負責處理。
8. 不同批號的產品請勿混合使用，請在有效期內使用試劑盒，由于操作不當引起的誤判，以及有此誤判引發(fā)的其他事項，本公司概不負責。
