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摘要本文件描述了液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法測定葡萄植株中7種植物內(nèi)源激素含量的原理,規(guī)定了試劑和材料、儀器和設(shè)備、分析步驟、結(jié)果計算和表述、精密度等的要求。

  【儀表網(wǎng) 行業(yè)標準】根據(jù)《中華人民共和國標準法》文件精神,由廣西大學(xué)、廣西西大檢測有限公司、廣西亞熱帶作物研究所、廣西壯族自治區(qū)產(chǎn)品質(zhì)量檢驗研究院、廣西思浦林科技有限公司共同起草的《葡萄植株中7種植物激素含量的測定 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法》征求意見稿已完成,依據(jù)《團體標準管理規(guī)定》和《廣西農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全服務(wù)協(xié)會團體標準管理辦法》的有關(guān)規(guī)定,現(xiàn)向社會公開征求意見。
 
  本文件按照GB/T 1.1—2020《標準化工作導(dǎo)則 第1部分:標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。
 
  本文件描述了液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法測定葡萄植株中7種植物內(nèi)源激素含量的原理,規(guī)定了試劑和材料、儀器和設(shè)備、分析步驟、結(jié)果計算和表述、精密度等的要求。
 
  本標準適用于葡萄植株的葉、芽、果等組織中玉米素、玉米素核苷、赤霉素A3、生長素、水楊酸、茉莉酸、脫落酸含量的測定。
 
  原理:
 
  試樣用異丙醇混合溶液低溫震蕩提取植物激素,經(jīng)反相色譜柱分離,液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法進行測定,外標法定量。
 
  儀器和設(shè)備:
 
  1.液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀:配電噴霧離子源(ESI)。
 
  2.電子天平:感量0.1mg。
 
  3.渦旋混勻器。
 
  4.低溫震蕩儀:溫度可至5℃。
 
  5.超低溫冰箱:溫度可至-80℃。
 
  6.氮吹儀。
 
  樣品制備:
 
  分別取新鮮的葡萄植株的葉、芽、果等部位供試樣,迅速用超純水洗凈樣品附著的雜物,表面水分用吸水紙擦干,立即保存于液氮中。將樣品從液氮中取出,置于研缽中加液氮磨細,混勻,立即轉(zhuǎn)移至-80 ℃冰箱避光保存。
 
  試樣處理:
 
  稱取0.2g(精確至0.1mg)制備好的試樣于15mL 塑料離心管中,加入2mL 預(yù)冷(4 ℃)的提取劑(5.5),置于5℃震蕩儀中以200r/min 振蕩1h,再加入4mL 預(yù)冷(4 ℃)的二氯甲烷(5.3),繼續(xù)震蕩1h,取二氯甲烷層氮吹至近干。加入0.5mL 預(yù)冷(4 ℃)的50%甲醇溶液(5.6)復(fù)溶,漩渦混勻,經(jīng)0.22μm 濾膜過濾,濾液供液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀測定。
 
  液相色譜參考條件:
 
  a)色譜柱:BEH C18柱,2.1 mm × 100mm,粒度1.7 μm,或性能相當者;
 
  b)流動相:流動相A為0.1%甲酸水溶液,流動相B為甲醇,梯度洗脫程序見表1;
 
  c)流速:0.3mL/min;
 
  d)柱溫:40 ℃;
 
  e)進樣量:5μL。
 
  質(zhì)譜參考條件:
 
  a)離子源:ESI源;
 
  b)掃描方式:正離子掃描模式和負離子掃描模式(參見附錄B);
 
  c)檢測方式:多反應(yīng)監(jiān)測(MRM);
 
  d)干燥氣、霧化氣、碰撞氣均為高純氮氣,使用前應(yīng)調(diào)節(jié)各氣體流量以使質(zhì)譜靈敏度達到檢測要求,參考條件參見附錄B;
 
  e)監(jiān)測離子對、錐孔電壓、碰撞能量等參數(shù)應(yīng)優(yōu)化至最佳靈敏度,參考條件參見附錄B。
 
  精密度:
 
  1.在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不大于其算術(shù)平均值的15%。
 
  2.在再現(xiàn)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不大于其算術(shù)平均值的20%。
 
  更多詳情請見附件。

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