艾美捷科技有限公司
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閱讀：1459發(fā)布時間：2013-9-22
要檢測一個基因的表達(dá)產(chǎn)物是否正確，或者比較表達(dá)產(chǎn)物量的相對變化，方法是Western Blot。雖然，順利的時候Western Blot做起來很簡單，可不順的時候也很令人心煩――做不出結(jié)果啦、假陽性啦、結(jié)果出現(xiàn)多條帶啦、到底是一抗有問題還是二抗有問題啦……畢竟，作為一種有活性的生物大分子，抗體和抗原的反應(yīng)畢竟不象1+1那么明確，而用這種不確定的試劑來測定同樣知之甚少的表達(dá)產(chǎn)物，確實是有一定的不確定性的。所以，嚴(yán)謹(jǐn)?shù)腤estern Blot實驗設(shè)計中要求有良好的參照體系，對實驗結(jié)果分析是非常有用的。
我們知道，要用Western Blot比較不同條件下或者不同組織中，目的蛋白表達(dá)量的相對多少，前提條件是等量的細(xì)胞上樣，才有比較的基礎(chǔ)。特別表達(dá)量不高時，上樣量的差別就很可能影響結(jié)果的分析。艾美捷向您推薦使用內(nèi)參抗體來檢測您的實驗系統(tǒng)，或者校準(zhǔn)您的實驗結(jié)果。內(nèi)參即是內(nèi)部參照（Internal Control），對于哺乳動物細(xì)胞表達(dá)來說一般是指由管家基因編碼表達(dá)的蛋白（Housekeeping Proteins），它們在各組織和細(xì)胞中的表達(dá)相對恒定，在檢測蛋白的表達(dá)水平變化時常用它來做參照物。在Western Blotting中使用內(nèi)參其實就是在WB過程中的另外用內(nèi)參對應(yīng)的抗體檢測內(nèi)參，這樣在檢測目的產(chǎn)物的同時可以檢測內(nèi)參的表達(dá)，由于內(nèi)參在各組織和細(xì)胞中的表達(dá)相對恒定，借助檢測每個樣品內(nèi)參的量就可以用于校正上樣誤差，這樣半定量的結(jié)果才更為可信。此外使用內(nèi)參可以作為空白對照，檢測蛋白轉(zhuǎn)膜情況是否*、整個Western Blot顯色或者發(fā)光體系是否正常。
實驗結(jié)果分析其實很簡單：如果樣品蛋白量有限，只夠進(jìn)行一次電泳轉(zhuǎn)膜實驗時，分別檢測樣品的內(nèi)參量和目的蛋白量。將各樣品目的蛋白量分別除以其內(nèi)參含量，得到的數(shù)值即為內(nèi)參校正后的各樣品中目的蛋白相對含量，再用此數(shù)值進(jìn)行樣品間的比較和分析，得到目的蛋白含量在不同樣品間的實際變化結(jié)果。如果樣品量充分，可以先檢測內(nèi)參，觀測樣品間內(nèi)參顯色條帶是否一致，根據(jù)差異大小調(diào)整各樣品的上樣量重新進(jìn)行Western Blotting實驗，至內(nèi)參量一致為止；若內(nèi)參一致，即可進(jìn)行不同樣品間目的蛋白表達(dá)變化分析。這樣雖然麻煩一點，但是可以保證結(jié)果更有說服力，更可信。畢竟我們的實驗是一種嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ鳌?br />
常用的細(xì)胞總蛋白質(zhì)內(nèi)參有GAPDH（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase）和細(xì)胞骨架蛋白beta-actin或beta-tubulin，這其中近的國外文獻(xiàn)報道中使用GAPDH內(nèi)參的較多。對于一些植物的樣本，則需要特別的植物Actin蛋白作為內(nèi)參；同樣的，如果提取的樣本是細(xì)胞核蛋白，那么PCNA或者組蛋白H3都是被經(jīng)常使用的；而針對一些研究線粒體的客戶，那么Cox IV則被較多的文獻(xiàn)引用作為線粒體總蛋白的內(nèi)部參考。美國Abbkine品牌提供非常完整的內(nèi)參產(chǎn)品解決方案，艾美捷公司向您推薦進(jìn)口Abbkine全系列內(nèi)參抗體產(chǎn)品，相關(guān)產(chǎn)品如下：
| 內(nèi)參抗體名稱 | 內(nèi)參類型 | 觀察分子量 | 品牌 | 貨號 | 詳情 |
| Beta-Actin mAb （1C7） | 細(xì)胞總蛋白 | 42 kD | Abbkine | A01010 | 小鼠源單克隆 |
| Beta-Actin mAb （1C7） , HRP | 細(xì)胞總蛋白 | 42 kD | Abbkine | A01015 | 小鼠源單克隆,HRP偶聯(lián) |
| GAPDH mAb （2B5） | 細(xì)胞總蛋白 | 36 kD | Abbkine | A01020 | 小鼠源單克隆 |
| GAPDH mAb （2B5） , HRP | 細(xì)胞總蛋白 | 36 kD | Abbkine | A01025 | 小鼠源單克隆,HRP偶聯(lián) |
| Beta-Tubuline mAb （3G6） | 細(xì)胞總蛋白 | 55 kD | Abbkine | A01030 | 小鼠源單克隆 |
| Plant Actin mAb （3T3） | 植物細(xì)胞總蛋白 | 42 kD | Abbkine | A01050 | 小鼠源單克隆 |
| PCNA mAb （1D7） | 細(xì)胞核蛋白 | 28 kD | Abbkine | A01040 | 小鼠源單克隆 |
| COX IV mAb （14Y2） | 細(xì)胞線粒體總蛋白 | 16 kD | Abbkine | A01060 | 小鼠源單克隆 |
| Histone H3 mAb （2D10） | 細(xì)胞核蛋白 | 18 kD | Abbkine | A01070 | 小鼠源單克隆 |
美國Abbkine品牌是一家提供高性價比免疫學(xué)和細(xì)胞學(xué)科研產(chǎn)品及解決方案的品牌，艾美捷將其引入中國，作為其中國區(qū)域代理，將為客戶提供的常規(guī)免疫學(xué)試劑，如各種標(biāo)簽抗體、內(nèi)參抗體、常規(guī)一抗以及全系列二抗，抗體檢測底物以及相關(guān)試劑盒等。同時我們作為多家品牌的的中國代理或 區(qū)域代理，艾美捷能為您提供系列的實驗室解決方案。如果您對上述產(chǎn)品感興趣，請致電* 轉(zhuǎn)801/802/803 或者/4876到艾美捷科技有限公司垂詢相關(guān)的產(chǎn)品信息及完整實驗解決方案
商鋪：http://www.ovololi.cn/st24821/
主營產(chǎn)品：$r$n分子生化產(chǎn)品 細(xì)胞生物學(xué)產(chǎn)品 免疫學(xué)產(chǎn)品 植物學(xué)產(chǎn)品 耗材
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