菌落總數(shù)快速測試片適合于各類食品及食品原料中菌落總數(shù)的測定，也可用于檢測食品加工容器、操作臺(tái)和其他設(shè)備表面的菌落總數(shù)。菌落總數(shù)是指樣品經(jīng)過處理，在一定條件下培養(yǎng)后所得1mL（g）檢樣或單位面積樣品中所含菌落的總數(shù)，是zui常用的微生物檢測項(xiàng)目。
菌落總數(shù)測試片（FilmplateTM Aerobic count plate BB202）是一種預(yù)先制備好的一次性培養(yǎng)基產(chǎn)品，含有標(biāo)準(zhǔn)的營養(yǎng)培養(yǎng)基，冷水可溶性的吸水凝膠和脫氫酶指示劑氯化三苯基四氮唑（TTC），菌落在測試片上呈紅色，這樣可縮短計(jì)數(shù)時(shí)間和增強(qiáng)計(jì)數(shù)效果。與傳統(tǒng)方法相比，省去了配制培養(yǎng)基、消毒和培養(yǎng)器皿的清洗處理等大量輔助性工作，隨時(shí)可以開始進(jìn)行抽樣檢測，而且操作簡便，通過酶顯色劑的放大作用，使菌落提前清晰地顯現(xiàn)出來，培養(yǎng)十幾小時(shí)就開始出現(xiàn)紅色菌斑，非常適合于食品衛(wèi)生檢驗(yàn)部門和食品生產(chǎn)企業(yè)使用。
執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)：食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)菌落總數(shù)測定——PetrifilmTM測試片法（GB/T 4789.2-2008）。經(jīng)試驗(yàn)驗(yàn)證，菌落總數(shù)快速測試片已達(dá)到倒平板法及國外同類產(chǎn)品的效果，具有外型美觀，計(jì)數(shù)方便，靈敏度高，準(zhǔn)確性好等特點(diǎn)。
菌落總數(shù)的檢驗(yàn)意義：
菌落總數(shù)測定是用來判定食品被細(xì)菌污染的程度及衛(wèi)生質(zhì)量，它反映食品在生產(chǎn)過程中是否符合衛(wèi)生要求，以便對(duì)被檢樣品做出適當(dāng)?shù)男l(wèi)生學(xué)評(píng)價(jià)。菌落總數(shù)的多少在一定程度上標(biāo)志著食品衛(wèi)生質(zhì)量的優(yōu)劣。
菌落總數(shù)快速測試片使用說明
2 操作方法
2.1 樣品處理：取樣品25mL（g）放入含有225mL滅菌磷酸緩沖液稀釋液（或生理鹽水）的取樣罐或均質(zhì)杯內(nèi)，制成1:10的樣品勻液，必要時(shí)用 1mol/LNaOH或1mol/L HCl溶液調(diào)節(jié)樣品勻液pH至6.6～7.2。用1mL滅菌吸管吸取1:10樣品勻液1mL，注入含有9mL稀釋液的試管內(nèi)，振搖后成為1:100的樣品勻液，以此類推，做出1:1000等稀釋度的樣品勻液，每次換一支吸管。
2.2 接種：一般食品選2～3個(gè)稀釋度進(jìn)行檢測，含菌量少的液體樣品（如飲用純水和礦泉水等）可直接吸取原液進(jìn)行檢測。將菌落總數(shù)測試片（BB202）置于平坦實(shí)驗(yàn)臺(tái)面，揭開上層膜，用無菌吸管吸取1mL樣品勻液慢慢均勻地滴加到紙片上，然后再將上層膜緩慢蓋下，靜置10s左右使培養(yǎng)基凝固，每個(gè)稀釋度接種兩片。同時(shí)做一片空白陰性對(duì)照。
2.3 培養(yǎng)：將測試片疊在一起放回原自封袋中并封口，透明面朝上水平置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，堆疊片數(shù)不超過12片。一般食品培養(yǎng)溫度為36℃±1℃，培養(yǎng)15～24h；水產(chǎn)品培養(yǎng)溫度為30℃±1℃，培養(yǎng)48h。
3 結(jié)果判讀
細(xì)菌在測試片上生長后會(huì)顯示紅色斑點(diǎn)，選擇菌落數(shù)適中（30～300個(gè)）的測試片進(jìn)行計(jì)數(shù)，乘以稀釋倍數(shù)后即為每毫升（克）樣品中所含的細(xì)菌菌落總數(shù)。
4 計(jì)數(shù)原則及報(bào)告方式
4.1 若只有一個(gè)稀釋度紙片上的菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi)，計(jì)算兩個(gè)紙片菌落數(shù)的平均值，再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)，作為每毫升（或克）樣品中菌落總數(shù)結(jié)果。
4.2 若有兩個(gè)連續(xù)稀釋度的紙片菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi)時(shí)，按式（1）計(jì)算:
式中：
N——樣品中菌落數(shù)；
∑C——測試片上（含適宜范圍菌落數(shù)的測試片）菌落數(shù)之和；
n1——*個(gè)適宜稀釋度測試片數(shù)；
n2——第二個(gè)適宜稀釋度測試片數(shù)；
d——稀釋因子（*稀釋度）。
示例：
| 稀釋度 | 1：100（*稀釋度） | 1：1000（第二稀釋度） |
| 菌落數(shù) | 232，244 | 33，35 |
上述數(shù)據(jù)經(jīng)“四舍五入”后，表示25000或2.5×104。
4.3 若所有的稀釋度菌落總數(shù)均大于300，則對(duì)稀釋度zui高的測試片進(jìn)行計(jì)數(shù)，其他測試片可記錄為多不可計(jì)，結(jié)果按平均菌落數(shù)乘以zui高稀釋倍數(shù)計(jì)算。
4.4 若所有的稀釋度菌落總數(shù)均小于30，則應(yīng)按稀釋度zui低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算。
4.5 若所有的稀釋度（包括液體樣品原液）均無菌落生長，則以小于1乘以zui低稀釋倍數(shù)計(jì)算。
4.6 若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在30～300之間，其中一部分小于30或大于300，則以zui接近30或300的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算。
4.7 菌落總數(shù)的報(bào)告
4.7.1 菌落總數(shù)在100以內(nèi)時(shí)，按“四舍五入”原則修約，采用兩位有效數(shù)字報(bào)告。
4.7.2 大于或等于100時(shí)，第三位數(shù)字采用“四舍五入”原則修約后，取前兩位數(shù)字，后面的0代替位數(shù)，也可用10的指數(shù)形式來表示，按“四舍五入”原則修約后，采用兩位有效數(shù)字。
4.7.3 若測試片上一片紅色無法計(jì)數(shù)時(shí)，則報(bào)告多不可計(jì)。
4.7.4 若空白對(duì)照上有菌落生長，則此次檢測結(jié)果無效。
4.7.5 稱重取樣以CFU/g為單位報(bào)告，體積取樣以CFU/mL為單位報(bào)告。
5 表面取樣方法
加1mL滅菌磷酸緩沖液（或生理鹽水）在測試片上，至少靜置5min，使培養(yǎng)基凝固；提起上層膜，使*濾紙部分貼到待測物表面，用手在外側(cè)輕壓；然后將上蓋膜合上，置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。
6 附加說明
6.1 菌落總數(shù)測試片檢測結(jié)果與傳統(tǒng)平板計(jì)數(shù)瓊脂平板法符合率可達(dá)80％以上，山東省疾病預(yù)防控制中心進(jìn)行的驗(yàn)證試驗(yàn)表明，24h計(jì)數(shù)測試片上菌落數(shù)為平板菌落數(shù)的87％。
6.2 磷酸緩沖液稀釋液的配制與滅菌：貯存液：稱取34.0g的磷酸二氫鉀溶于500mL蒸餾水中，用大約175mL的1mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至 7.2，用蒸餾水稀釋至1000mL后貯存于冰箱。稀釋液：取貯存液1.25mL，用蒸餾水稀釋至1000mL，分裝于適宜容器中，121℃高壓滅菌15 分鐘，或者放入消毒碗柜中消毒。
6.3 生理鹽水的配制與滅菌：取8.5g分析純氯化鈉（NaCl）溶解到1000mL蒸餾水或純凈水中，先煮開后進(jìn)行分裝，取9mL加入到10mL潔凈試管中，蓋上硅橡膠塞或棉紗塞，放入紅外線消毒柜中消毒。
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