溫育是豚鼠ELISA試劑盒測定中影響測定成敗zui為樞紐的一個(gè)因素。目前臨床上使用血清標(biāo)本測定的標(biāo)志物一般有傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標(biāo)志物、激素、特種蛋白、細(xì)胞因子和治療藥物等。試劑的加入在國產(chǎn)試劑盒中基本上均是從滴瓶中滴加，除了要留意滴加的角度外，滴加的速度也很重要，滴加太快，很輕易泛起重復(fù)滴加或加在兩孔之間的現(xiàn)象，這樣就會在孔內(nèi)的非包被區(qū)泛起非特異吸附，從而引起非特異顯色。如可的松在早晨4～6點(diǎn)之間，會有一峰值泛起：生長激素、促黃體激素（LH）和促卵泡激素（FSH）均以陣發(fā)性方式開釋，因此，在測定此類激素時(shí)，有必要在緊密親密相連的時(shí)間距離內(nèi)采取數(shù)份血樣本，以其中間值為測定值。因此在豚鼠ELISA試劑盒測定中試劑的預(yù)備zui為樞紐的是，在實(shí)驗(yàn)開始前，將試劑盒先從冰箱中拿出來，在室溫下放置20分鐘以上后，再進(jìn)行測定，以使試劑盒在使用前與室溫平衡。加血清樣本及反應(yīng)試劑在現(xiàn)在的ELISA試劑盒中，血清樣本的加入幾乎是*的要使用微量加樣器加入樣本的步驟。
     溫育這一步是臨床ELISA測定中zui容易出現(xiàn)問題的步驟，所以有時(shí)候一份標(biāo)本用相同的試劑盒這次測定為陽性，下次測定為陰性，往往就是上述加樣及試劑的錯(cuò)誤所致。加在孔壁上部的非包被區(qū)，易導(dǎo)致非特異吸附。其次，目前的商品豚鼠ELISA試劑盒中的洗板液均需在實(shí)驗(yàn)室使用時(shí)對所提供的濃縮液稀釋配制，因此稀釋時(shí)所用的蒸餾水或去離子水應(yīng)保證質(zhì)量。zui為常用的溫育溫度有37℃和室溫，其次是43℃和2～8℃。這樣做的目的，主要是為了在后面的溫育反應(yīng)步驟中，能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度能較快地達(dá)到所要求的高度，以知足測定要求。再如治療藥物的檢測，應(yīng)根據(jù)藥代動力學(xué)選擇服藥后的zui適時(shí)間抽血檢測。溫育所需時(shí)間與溫度成反比，即溫度越高，則所需時(shí)間相對較短。使用微量加樣器加樣必需留意的樞紐點(diǎn)是：加樣不可太快，要避免加在孔壁上部，不可濺出和產(chǎn)氣憤泡。對用于激素和治療藥物測定的血清標(biāo)本的收集，要留意收集時(shí)間甚或體位有可能會對測定結(jié)果產(chǎn)生影響。