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ELISA試劑盒吸光度測(cè)定值

時(shí)間:2016/10/17閱讀:342
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  ELISA試劑盒測(cè)定疫苗抗體之如何處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。此時(shí)測(cè)得的吸光度即為臟物的吸光度值。zui后酶標(biāo)儀給出的數(shù)值為敏感波長(zhǎng)下的吸光度值與非常感波長(zhǎng)下的吸光度值的差。因此,雙波長(zhǎng)比色測(cè)定具有能排除由微滴板本身、板孔內(nèi)標(biāo)本的非特異吸收、指紋、刮痕、灰塵等對(duì)特異顯色測(cè)定吸光度的影響的優(yōu)點(diǎn)。由于ELISA試劑盒測(cè)定中單個(gè)空白孔的非特異吸收上有一定程度的不確定性,也就是說(shuō)每次測(cè)定或同次測(cè)定空白孔位置的不同均有可能得到不同,故而在ELISA試劑盒測(cè)定比色時(shí),是使用雙波長(zhǎng)比色。
  ELISA試劑盒做得很好的話批間CV都要有10~15%左右,用同一個(gè)抗原,但對(duì)于包被的抗原濃度對(duì)OD的影響不是很大,只要不是差別太大即可。抗血清當(dāng)然要用同一個(gè)稀釋度了。另外比較的話就必每批,每塊板上的樣品都要伴隨著一個(gè)參比品一同做,參比品還是同一個(gè)這樣才能保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可比性。1) 高結(jié)合力
  此種酶標(biāo)板,表面經(jīng)處理后,其蛋白結(jié)合能力大大增強(qiáng),可達(dá)300~400ng IgG/cm2,主要結(jié)合的蛋白分子量>10kD。使用該類(lèi)酶標(biāo)板可提高敏感性,并可相對(duì)減少包被蛋白的濃度和用量,ELISA試劑盒不足之處為較易產(chǎn)生非特異性反應(yīng)??乖蚩贵w包被后,以非離子去污劑無(wú)法有效地封閉未結(jié)合蛋白的部位,需使用蛋白作為封閉劑。
2) 中結(jié)合力
   此類(lèi)酶標(biāo)板經(jīng)表面疏水鍵被動(dòng)與蛋白結(jié)合,適合作為分子量>20kD的大分子蛋白的固相載體,其蛋白結(jié)合能力為200~300ng IgG/cm2。由于該類(lèi)酶標(biāo)板所具有的僅與大分子結(jié)合的特性,適用于作為未純化抗體或抗原的固相載體,可降低潛在的非特異叉反應(yīng)。該類(lèi)板可以惰性蛋白或非離子去污劑作為封閉液。
3)氨基化
   ELISA試劑盒這種酶標(biāo)板經(jīng)表面改性處理后擁有帶正電荷的氨基,其疏水鍵由親水鍵取代。該類(lèi)酶標(biāo)板適合作為小分子蛋白的固相載體。使用合適的緩沖液和pH值,ELISA試劑盒其表面可通過(guò)離子鍵與帶負(fù)電荷的小分子結(jié)合。由于其表面的親水特性和可通過(guò)其它交聯(lián)劑共價(jià)結(jié)合的能力,可用于固定溶于Triton-100、Tween 20等去污劑的蛋白分子。

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