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ELISA試劑盒的技能關(guān)鍵包含三個(gè)方面:試劑的制備、反響條件的挑選和操作的標(biāo)準(zhǔn)化。一、試劑的制備ELISA的主要試劑為固相的抗原或抗體、酶符號(hào)的抗原或抗體和與符號(hào)酶直接相關(guān)的酶反響底物。以下敘說(shuō)這些試劑的質(zhì)料和制備辦法。
(一)固相載體可作 ELISA試劑盒中載體的物質(zhì)許多,zui常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有較強(qiáng)的吸附蛋白質(zhì)的功能,抗體或蛋白質(zhì)抗原吸附其上后保存本來(lái)的免疫活性。聚苯乙烯為塑料,可制成各種形式。
(二)免疫吸附劑固相的抗原或抗體稱(chēng)為免疫吸附劑。將抗原或抗體固相化的過(guò)程稱(chēng)為包被(coating)。由于載體的不同,包被的辦法也不同。如以聚苯乙烯ELISA板為載體,通常將抗原或抗體溶于緩沖液(zui常用的為pH9.6的碳酸緩沖液)中,加于ELISA板孔中在4℃,經(jīng)清洗后即可運(yùn)用。如果包被液中的蛋白質(zhì)濃度過(guò)低,ELISA試劑盒固相載體表面有能被此蛋白質(zhì)*掩蓋,其后參加的血清標(biāo)本和酶結(jié)合物中的蛋白質(zhì)也會(huì)部分地吸附于固相載體表面,zui終發(fā)生非特異性顯色而導(dǎo)致本底偏高。
(三)抗原和抗體在 ELISA試劑盒施行過(guò)程中,抗原和抗體的質(zhì)量是試驗(yàn)是否成功的關(guān)鍵因素。本法要求所用抗原純度高,抗體效價(jià)高、親和力強(qiáng)。 ELISA試劑盒 所用抗原有三個(gè)來(lái)源:天然抗原、重組抗原和組成多肽抗原。天然抗原取材于動(dòng)物安排或體液、微生物培育物等,一般含有多種抗原成分,需經(jīng)純化,提取出特定的抗原成分后才可運(yùn)用,因而也稱(chēng)提純抗原(purifiedantigen)。重組抗原(recombinantantigen)和多肽抗原(peptideantigen)均為人工組成品,運(yùn)用安全,并且純度高,攪擾物質(zhì)少。
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