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當(dāng)前位置:上海紀(jì)寧實(shí)業(yè)有限公司>>技術(shù)文章>>elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)步驟
1. 血清收集保存: elisa試劑盒收集不抗凝血液3-5ml,保存4℃冰箱中,在恒溫離心機(jī)中 以4℃,3500r離心10min,收集上層血清,以200ul/管分管編號(hào)凍存-80℃冰箱中。
2. 包被:用包被液(CBS)稀釋八種抗原至5ug/ml,以100ul/孔加入酶標(biāo)板 中,空白孔加100ul/孔3%BSA+PBS.
3.. 封閉:棄上清液,加封閉液(5%BSA+PBST)200ul/孔,37℃放置2h。
4.. 洗滌:以洗滌液洗滌5次,5min/次。 elisa試劑盒加血清樣品:將凍存血清逐級(jí)解凍至室溫,將待測(cè)血清(1:30稀釋于 1%BSA+PBST)中,以100ul/孔加入酶標(biāo)本中,37℃放置2h,陰性對(duì)照孔加100ul/孔稀釋液(1%BSA+PBST).
5. 洗滌:用洗滌液洗滌5次,5min/次。
6.. 加酶標(biāo)二抗:人抗IgG抗體-HRP,用1%BSA+PBST 液1:10000稀釋?zhuān)?00ul/孔,37℃恒溫箱溫育2h。
7. 洗滌:洗滌液洗滌5次,5min/次。
8. 顯色:加新鮮配制的底物(TMB:A液和B液等體積混合)100ul/孔。 10. 中止反應(yīng)、比色:加50ul/孔中止液(2M H2SO4), elisa試劑盒用酶標(biāo)儀測(cè)定吸收值(450nm),根據(jù)P/N確定陽(yáng)性值。 1 血清特異性IgE檢測(cè) 小鼠檢測(cè)完AHR后24h內(nèi)處死動(dòng)物,摘眼球取血,室溫下靜置30min,4℃4000rmp/min離心10min,小心吸取上層血清,分裝-80℃保存?zhèn)溆?。采用間4℃放 置過(guò)夜12h上。
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