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ELISA試劑盒各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要

時(shí)間:2018/2/1閱讀:237
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ELISA試劑盒試驗(yàn)是一種敏感性高,特異性強(qiáng),重復(fù)性好的試驗(yàn)確診辦法。因?yàn)槠湓噭┌卜€(wěn)、易保存,操作簡便,結(jié)果判斷較客觀等要素,已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)查驗(yàn)的各領(lǐng)域中,進(jìn)行各項(xiàng)試驗(yàn)條件的挑選是很重要的,其間包含:
(1) 固相載體的挑選:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其方式可所以凹孔平板、試管、珠粒等。現(xiàn)在常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不論何種載體,在運(yùn)用前均可進(jìn)行挑選:用等量抗原包被,在同一試驗(yàn)條件下進(jìn)行反響,調(diào)查其顯色反響是否均一性,據(jù)此判明其吸附功能是否杰出。
(2) ELISA試劑盒包被抗體(或抗原)的挑選:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時(shí),要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時(shí)刻及其蛋白量也有必定影響,一般多選用4℃ 18~24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的*適濃度需進(jìn)行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進(jìn)行包被后,在其它試驗(yàn)條件相同時(shí),調(diào)查陽性標(biāo)本的OD值。挑選OD值而蛋白量*少的濃度。對于大都蛋白質(zhì)來說一般為1~10μg/ml。
(3) 酶符號抗體作業(yè)濃度的挑選:首先用直接ELISA法進(jìn)行開始效價(jià)的滴定(見酶符號抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參閱品及酶符號抗體分別為不同的稀釋度)在正式試驗(yàn)系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其作業(yè)濃度。
(4) ELISA試劑盒酶的底物及供氫體的挑選:對供氫體的挑選要求是價(jià)廉、安全、有明顯地顯色反響,而自身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌效果,應(yīng)注意防護(hù)。elisa試劑盒有條件者應(yīng)運(yùn)用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是現(xiàn)在較為滿足的供氫體。底物效果一段時(shí)刻后,應(yīng)參加強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以停止反響。一般底物效果時(shí)刻,以10-30分鐘為宜。底物運(yùn)用液有必要新鮮制造,尤其是H2O2在臨用前參加。

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