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測定抗原或抗體方法中的三個必要條件:
(1)固相的抗菌素原或抗體,即"免疫吸附劑。
(2)酶標記的抗原或抗體,稱為"結(jié)合物"(conjugate)。
(3)酶反應(yīng)的底物,根據(jù)試劑的來源和標本的情況以及檢測的具體條件,可設(shè)計出各種不類型的檢測方法。
ELISA試劑盒直接法和間接法優(yōu)缺點比較:
1、直接法:將抗原直接固定在固相載體上,加入酶標記的一級抗體,即可測定抗原總量,此一級抗體的特異性非常重要。
1)優(yōu)勢:操作手續(xù)簡短,因無須使用二抗可避免交互反應(yīng)。
2)缺點:試驗中的一抗都得用酶標記,但不是每種抗體都適合做標記,費用相對提高。
2、間接法:此測定方法與直接法類似,差別在于一級抗體沒有酶標記,改用酶標記的二級抗體去辨識一級抗體來測定抗原量。
1)優(yōu)勢:二抗可以加強信號,而且有多種選擇能做不同的測定分析,不加酶標記的一級抗體則能保留它多的免疫反應(yīng)性。
2)缺點:交互反應(yīng)發(fā)生的機率較高。
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