在ELISA試劑盒試驗(yàn)中各種酶標(biāo)儀功能都會(huì)有所不同，所以在運(yùn)用中應(yīng)具體閱覽說明書，再進(jìn)行下一步操作。
自從20世紀(jì)60-70時(shí)代面世以來，ELISA試劑盒法得到*科研工作者的認(rèn)可及推重，在歐美及中國取得很大的推行，尤其是國內(nèi)生化范疇的長足發(fā)展。ELISA試劑盒有著性高、靈敏度高、特異性強(qiáng)等許多的長處，它在檢測抗體、抗原等方面有很好的使用，深受廣闊用戶朋友的喜歡。然而，在試驗(yàn)過程中，也需求留意許多問題，特別是顯色、比色問題。
顯色是ELISA試劑盒中的zui后一步溫育反響，此刻酶催化無色的底物生成有色的產(chǎn)品。反響的溫度和時(shí)刻仍是影響顯色的要素。在必定時(shí)刻內(nèi)，陰性孔可堅(jiān)持無色，而陽性孔則隨時(shí)刻的延伸而呈色加強(qiáng)。恰當(dāng)進(jìn)步溫度有助于加快顯色進(jìn)行。在定量測定中，參加底物后的反響溫度和時(shí)刻應(yīng)按規(guī)則力求。定性測定的顯色可在室溫進(jìn)行，時(shí)刻一般不需求嚴(yán)格控制，有時(shí)可根據(jù)陽性對(duì)照孔和陰性對(duì)照孔的顯色恰當(dāng)縮短或延伸反響時(shí)刻，及時(shí)判別。
ELISA試劑盒OPD（鄰苯二胺）底物顯色一般在室外溫或37℃反響20-30分鐘后即不再加深，再延伸反響時(shí)刻，可使本底值增高。OPD底物液受光照會(huì)自行變色，顯色反響應(yīng)避光進(jìn)行，顯色反響結(jié)束時(shí)參加停止液停止反響。OPD產(chǎn)品用硫酸停止后，顯色由橙黃色轉(zhuǎn)向棕黃色。
ELISA試劑盒MB（四甲基聯(lián)苯胺）受光照的影響不大，可在室溫中置于操作臺(tái)上，邊反響調(diào)查成果。但為確保試驗(yàn)成果的穩(wěn)定性，宜在規(guī)則的恰當(dāng)時(shí)刻閱覽成果。TMB經(jīng)HRP作用后，約40分鐘顯色達(dá)，隨即逐步削弱，至2小時(shí)后即可*衰退至無色。TMB的停止液有多種，疊氮鈉和十二烷基硫酸鈉（SDS）等酶抑制劑均可使反響停止。這類停止劑尚能使藍(lán)色維持較長時(shí)刻（12-24小時(shí)）不褪，是目視判別的良好停止劑。此外，各類酸性停止液則會(huì)使藍(lán)色轉(zhuǎn)變成黃色，此刻可用特定的波長（450nm）測讀吸光值。