ELISA試劑盒操作過(guò)程
①兔抗人IgG 作為抗原，用包被液l：8000稀釋，100μL/孔參加聚苯乙烯96孔反響板中。4℃放置過(guò)夜。
②洗刷：次日傾去凹孔內(nèi)的液體，洗刷液洗3次。
③封閉：加l00μL/孔封閉液，室溫放置0.5h.
④洗刷：用洗刷液洗3次。
⑤加待測(cè)樣品(一抗)：將含單克降抗體的細(xì)胞培養(yǎng)上清在另-塊板上用PBS 連續(xù)稀釋(依照1：2或1：10)，100μL /孔加到 已包被的板上，每個(gè)樣品平行做兩份，PBS或空白培養(yǎng)基作為陰性對(duì)照。
ELISA試劑盒已知樣品作為陽(yáng)性對(duì)照。加蓋37℃恒溫箱溫育 1~2h。
⑥洗刷：用洗刷液洗3次。
⑦加酶標(biāo)抗抗體：兔抗鼠IgG-HRP，用封閉液l ：8000稀釋，100μL／孔，加蓋37℃恒溫箱溫育1h。
⑧洗刷：用洗刷液洗5次，蒸餾水洗2次。
⑨顯色：加新鮮制造的底物溶液100μL/孔，室溫暗處放置5～30min，顯現(xiàn)藍(lán)色。
⑩停止反響、比色：加50μL/孔停止液。色彩變黃；ELISA試劑盒用酶標(biāo)儀測(cè)定450nm 處各孔的吸光值，陽(yáng)性反響的zui大稀釋度為待測(cè)樣品的效價(jià)。
自個(gè)也為此煩惱過(guò)很長(zhǎng)一段時(shí)間，跟著自個(gè)技術(shù)水平得前進(jìn)，或多或少地也把握了ELISA體系的脾氣，也是游刃有余吧，如今做方陣，ELISA試劑盒已是輕車熟路了，曾經(jīng)檢查一種抗體用整整一下戰(zhàn)書還算得暈暈的，如今給我十個(gè)八個(gè)的從包被到顯色，一個(gè)工作日根本搞定。
ELISA試劑盒檢查系統(tǒng)可謂是免疫學(xué)反響應(yīng)用到科研出產(chǎn)中zui為靈敏的技術(shù)手段。
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