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酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)保存問題把控

時間:2024/12/2閱讀:207
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   酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA因其操作簡單,靈敏度高,特異性好,經(jīng)濟安全等特點而在臨床上廣泛應(yīng)用,但是由于其操作步驟復(fù)雜,一般包括試劑準備,樣本收集,加樣,溫育,洗滌,顯色,比色,結(jié)果判定等,其中任何一項操作不當都會對檢測結(jié)果產(chǎn)生很大影響。因此,必須加強ELISA檢測的全面質(zhì)量控制,保證其結(jié)果的準確可靠。酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)保存問題把控:

1ELISA試劑盒要注意避免出現(xiàn)嚴重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團,其有類似過氧化物的活性,因此,在以HRP為標記酶的ELISA試劑盒測定中,如血清標本中血紅蛋白濃度較高,則其就很容易在溫育過程中吸附于固相,從而與后面加入的HRP底物反應(yīng)顯色。

2、樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細菌污染,一則細菌的生長,其所分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用;二則一些細菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會對用相應(yīng)酶作標記的測定方法產(chǎn)生非特異性干擾。

3、血清標本如是以無菌操作分離,則可以在28℃下保存一周,如為有菌操作,則建議冰凍保存。樣本的長時間保存,應(yīng)在-70℃以下。

4、冰凍保存的血清標本須注意避免因停電等造成的反復(fù)凍融。ELISA試劑盒標本的反復(fù)凍融所產(chǎn)生的機械剪切力將對標本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用,從而引起假陰性結(jié)果。此外,凍融標本的混勻亦應(yīng)注意,不要進行劇烈振蕩,反復(fù)顛倒混勻即可。

5、標本在保存中如出現(xiàn)細菌污染所致的混濁或絮狀物時,應(yīng)離心沉淀后取上清檢測。Elisa試驗是一種敏感性高,特異性強,重復(fù)性好的實驗診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存,操作簡便,結(jié)果判斷較客觀等因素,已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗的各領(lǐng)域中。

 


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