細胞周期操作步驟

時間：2025/5/14閱讀：154

細胞周期指細胞一個世代所經(jīng)歷的時間。從一次細胞分裂結束到下一次分裂結束為一個周期。細胞周期反應了細胞增殖速度。

操作步驟：

1、細胞生長至指數(shù)期時，向培養(yǎng)液中加入BrdU，使終濃度為10μg/ml。

2、44小時加秋水仙素，使每ml中含0.1μg。

3、48小時后常規(guī)消化細胞至離心管中，注意培養(yǎng)上清的漂浮細胞也要收集到離心管中。

4、常規(guī)染色體制片（見第三部分：染色體技術）。

5、染色體玻片置56℃水浴鍋蓋上，鋪上2×SSC 液，距紫外燈管6cm處紫外照射30分鐘。

6、棄去2×SSC液，流水沖洗。

7、Giemsa液染色10分鐘，流水沖洗，晾干。

8、鏡檢100個分裂相，計、二、三、四細胞期分裂指數(shù)。

9、計算：細胞周期（Tc）=48/{（M1+2M2+3M3+4M4）/100}（小時）

附：（1）BrdU配制: BrdU 10mg十雙蒸水10ml 4℃下避光保存。

（2）2×SSC配制: NaCl 1.75克，檸檬酸三鈉•2H2O 0.88克，加水至100ml，4℃保存。

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