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細(xì)胞凍存實(shí)驗(yàn)步驟

時(shí)間:2025/6/16閱讀:147
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細(xì)胞凍存實(shí)驗(yàn)步驟:

1. 制備凍存液,凍存液比例:本實(shí)驗(yàn)室采用70%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+20%FBS+10%DMSO,不同實(shí)驗(yàn)室及不同細(xì)胞可能略有差異,也可采用55%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO;

2. 取形態(tài)良好,處于對(duì)數(shù)生長期的細(xì)胞,對(duì)其消化、離心 (1500rpm離心8min)、計(jì)數(shù);

3. 根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入對(duì)應(yīng)的凍存液,使細(xì)胞密度維持在300-500w/mL;

4. 小心用鑷子打開凍存管管蓋,每管分裝1-1.5mL含細(xì)胞的凍存液,擰緊蓋管,做好標(biāo)記。

5. 分裝好的凍存管轉(zhuǎn)入程序降溫盒后直接放-80℃過夜;

6. 若沒有程序降溫盒,則按下列順序依次降溫:室溫→4℃20min→-20℃30min→-80℃過夜,注意轉(zhuǎn)移過程中要保冷,避免產(chǎn)生溫差或凍存管融化;

7. 從-80℃冰箱取出凍存管迅速轉(zhuǎn)移到液氮長期保存。


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