免疫熒光技術(shù)的實(shí)驗(yàn)步驟：
一、準(zhǔn)備好試劑與儀器：
磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標(biāo)記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。
二、實(shí)驗(yàn)步驟
1.滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于待檢標(biāo)本片上，十分鐘后棄去，使標(biāo)本保持一定濕度。
2.滴加適當(dāng)稀釋的熒光標(biāo)記的抗體溶液，使其*覆蓋標(biāo)本，置于有蓋搪瓷盒內(nèi)，保溫一定時(shí)間以三十分鐘為參考。
3.取出玻片，置玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS沖洗后，再按順序過0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸三到五分鐘，并不停地?fù)u晃振蕩。
4.取出玻片，用濾紙吸去多余水分，但不使標(biāo)本干燥，加一滴緩沖甘油，以蓋玻片覆蓋。
5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標(biāo)本的特異性熒光強(qiáng)度。
詳細(xì)介紹：

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抗體的制備過程：
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白，通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)獲得重組蛋白，純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小，需要偶聯(lián)載體對該分子進(jìn)行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原，常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動(dòng)物
常用于制備抗血清的動(dòng)物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等，大量生產(chǎn)時(shí)需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動(dòng)脈采血，家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血，家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定得到的抗血清需要進(jìn)一步的純化，利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進(jìn)行層析，具有高效，特異性強(qiáng)，純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。5. 免疫血清的保存建議將抗體分裝后進(jìn)行保存。抗體一般比較穩(wěn)定，在-80℃ ～-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價(jià)，而真空干燥保存時(shí)間可以更久。產(chǎn)品僅用于科研保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
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抗體的生活習(xí)性：
(1)結(jié)合特異性抗原：抗體與其他免疫球蛋白分子區(qū)別，就在于抗體能與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合，在體內(nèi)導(dǎo)致生理或病理效應(yīng);在體外產(chǎn)生各種直接或間接的可見的抗原抗體結(jié)合反應(yīng)?？贵w是靠其分子上的特殊的結(jié)合部位與抗原結(jié)合的。
(2)激活補(bǔ)體：抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合后，借助暴露的補(bǔ)體結(jié)合點(diǎn)去激活補(bǔ)體系統(tǒng)、激發(fā)補(bǔ)體的溶菌、溶細(xì)胞等免疫作用。
(3)結(jié)合細(xì)胞：不同類別的免疫球蛋白，可結(jié)合不同種的細(xì)胞，產(chǎn)生不同的疚，參與免疫應(yīng)答。
(4)可通過胎盤及粘膜：免疫球蛋白G(IgG)能通過胎盤進(jìn)入胎兒血流中，使胎兒形成自然被動(dòng)免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通過消化道及呼吸道粘膜，是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。
(5)產(chǎn)品僅用于科研具有抗原性：抗體分子是一種蛋白質(zhì)，也具有刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的性能。不同的免疫球蛋白分子，各具有不同的抗原性。
(6)抗體對理化因子的抵抗力與一般球蛋白相同：不耐熱，60～70℃即被破壞。各種酶及能使蛋白質(zhì)凝固變性的物質(zhì)，均能破壞抗體的作用?？贵w可被中性鹽類沉淀。在生產(chǎn)上?？捎昧蛩徜@或硫酸鈉從免疫血清中沉淀出含有抗體的球蛋白，再經(jīng)透析法將其純化。
凍干血漿成骨細(xì)胞培養(yǎng)基虹膜色素上皮細(xì)胞factor VIII  第八因子相關(guān)抗原(多肽片斷抗原)

DNA酶瓊脂軟骨細(xì)胞培養(yǎng)基晶狀體上皮細(xì)胞FAS (Apo-a1; CD95;)(抗原)  載脂蛋白-a1

7.5%肉湯滑膜細(xì)胞培養(yǎng)基角膜上皮細(xì)胞Agrin peptide  聚集蛋白抗原

7.5%肉湯髓核細(xì)胞培養(yǎng)基角膜內(nèi)皮細(xì)胞Agtr1/AT1a(Angiotensin II receptor, type 1a)  血管組織血管緊張素Ⅱ1型受體抗原

普通肉湯培養(yǎng)基肝細(xì)胞培養(yǎng)基視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞FasL(抗原)  

亞碲酸鈉肉湯培養(yǎng)基基礎(chǔ)星形細(xì)胞培養(yǎng)基骨細(xì)胞Ah Receptor(Aryl Hydrocarbon Receptor)  芳香烴受體抗原

葡萄球菌增菌肉湯心肌細(xì)胞培養(yǎng)基滑膜細(xì)胞Fe65 protein peptide  Fe65 蛋白（多肽抗原）

葡萄球菌選擇性瓊脂滋養(yǎng)層細(xì)胞培養(yǎng)基骨骼肌細(xì)胞FGF1 (aFGF )(ECGF-beta)(HBGF-1)  肝素結(jié)合生長因子( 酸性成纖維細(xì)胞生長因子）（多肽片斷抗原）

Gentamicin/FITC  熒光素標(biāo)記慶大霉素IgG膜糖蛋白CD2002-羥基-5-三氟甲基吡啶Rat PTH (Parathyroid Hormone) 檢測試劑盒

GFAP/FITC  熒光素標(biāo)記膠質(zhì)纖維酸性蛋白IgG胰羧肽酶A12-羥基-5-三氟甲基吡啶Rat PTHR2 (Parathyroid Hormone Receptor 2) 檢測試劑盒

GFP/FITC  熒光素標(biāo)記綠色熒光蛋白IgG羧肽酶A23,6-二溴-9-乙基咔唑Rat PTHRP (Parathyroid Hormone Related Protein) 檢測試劑盒

GFP/FITC  熒光素標(biāo)記綠色熒光蛋白IgG腦源性免疫球蛋白超家族蛋白33,6-二溴-9-乙基咔唑Rat PDAP1 (Pdgfa Associated Protein 1) 檢測試劑盒

GFP/FITC (Green Fluorecent protein)  熒光素標(biāo)記兔抗綠色熒光蛋白IgG胰羧肽酶B1(3-氯-2-羥基)*基氯化銨 溶液Rat PTD (Pentosidine) 檢測試劑盒

human Fibrinogen/Biotin  生物素化兔抗人纖維蛋白原細(xì)胞維甲酸結(jié)合蛋白2(3-氯-2-羥基)*基氯化銨 溶液Rat PP (Pepsin) 檢測試劑盒

GFR Alpha-1/GDNF /FITC  熒光素標(biāo)記GDNF家族受體α-1IgG2號染色體開放閱讀框802,5-二甲氧基二Rat PYY (Peptide YY) 檢測試劑盒

GFRA4/FITC  熒光素標(biāo)記GDNF家族受體α-4IgG磷酸化CD32B2,5-二甲氧基二Rat PRF1 (Perforin 1) 檢測試劑盒  
細(xì)胞色素P450Ⅱj3抗體釀酒酵母Mouse PAL (L-Phenylalanine ammonla-lyase)  Kit

副豬嗜血桿Mouse LHRH (Luteinizing Hormone-Reasing Hormone)  Kit

強(qiáng)壯類芽孢桿Mouse LFA-3 (lymphocyte function associated antigen 3)  Kit

費(fèi)希爾曲霉Mouse Lptn/XCL1 (Lymphotactin)  Kit

釀酒酵母Mouse LZM (Lysozyme)  Kit

栗疫M(jìn)ouse BSP (Bone Sialoprotein)  Kit

米曲霉Mouse MIP-1δ (Macrophage Inflammatory Protein 1δ)  Kit

J53大腸Mouse FPN (Ferroportin)  Kit