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6-磷酸葡萄糖脫氫酶(G6PDH)操作步驟

時(shí)間:2021/7/7閱讀:573
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6-磷酸葡萄糖脫氫酶(G6PDH)操作步驟:
1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,在第一、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,然后在第一、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后從第一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。
2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
7.溫育:操作同3。
8.洗滌:操作同5。
9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

 

Ampholine PH4-6/5-7/6-9/3-9.5 國產(chǎn)
(兩性電解質(zhì)) 12ml
AmphotericinB 50mg/100mg/1g原裝 Amresco E437
(Solubilized)
(可溶性兩性霉素B)
AmphotericinB 100mg原裝/500mg/1g原裝 INALCO1758-9313
(兩性霉素B)
Ampicilin,Na 1g/5g/25g原裝 Amresco分裝
(氨芐青霉素鈉鹽)
AMPNa2 5g/25g/100g/500g原裝 Amresco 0634
(5’-磷酸腺苷二鈉)
AMPSO 25g/100g/1kg原裝 Amresco J625
AMVReverseTranscriptase 300u/1000u Promega原裝
(逆轉(zhuǎn)錄酶)
Amylopectin 1g/5g/10g/25g原裝 Sigma A8515
(支鏈淀粉)
Amylose 250mg/1g/5g/25g原裝 Sigma A0512
(直鏈淀粉)
a-Naphthaleneaceticacid 5g/25g/100g原裝 Sigma N0640
(NAA)
(a-萘乙酸)
apo-Transferrin 25mg/100mg/500mg原裝 Sigma T4382
(轉(zhuǎn)鐵蛋白)
Aprotinin 2mg/5mg/10mg/100mg原裝 Roche11583794001
(蛋白酶抑制劑)

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