蜥蜴17羥孕酮（17-OHP）ELISA試劑盒使用方法:

測(cè)定法的靈敏度來自作為報(bào)告的酶。酶是一種有機(jī)催化劑,很少量的酶即可誘導(dǎo)大量的催化反應(yīng),產(chǎn)生可供觀察的顯色反應(yīng)現(xiàn)象。因此該體系常被稱為酶放大體系。

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。   24μg/ml    5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

12μg/ml    4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

6μg/ml     3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

3μg/ml     2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

1.5μg/ml   1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

2. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。|

3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。 

4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。

7. 溫育:操作同3。

8. 洗滌:操作同5。

9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

11. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

細(xì)菌凍存液50ml

pUCm-T載體20次

pGL6(報(bào)告基因質(zhì)粒)1μg

pGL6-TA(報(bào)告基因質(zhì)粒)1μg

pGL6-miR(報(bào)告基因質(zhì)粒)1μg

pAP1-luc(報(bào)告基因質(zhì)粒)1μg

pAP1-TA-luc(報(bào)告基因質(zhì)粒)1μg

pARE-luc(報(bào)告基因質(zhì)粒)1μg

pGRE-luc(報(bào)告基因質(zhì)粒)1μg

pISRE-TA-luc(報(bào)告基因質(zhì)粒)1μg

pMyc-TA-luc(報(bào)告基因質(zhì)粒)1μg

pNFκB-luc(報(bào)告基因質(zhì)粒)1μg

pNFκB-TA-luc(報(bào)告基因質(zhì)粒)1μg

pp53-TA-luc(報(bào)告基因質(zhì)粒)1μg

pRb-TA-luc(報(bào)告基因質(zhì)粒)1μg

pSTAT3-TA-luc(報(bào)告基因質(zhì)粒)1μg

pAAT-promoter-luc(報(bào)告基因質(zhì)粒)1μg

pIL-6-promoter-luc(報(bào)告基因質(zhì)粒)1μg

pTNF-α-promoter-luc(報(bào)告基因質(zhì)粒)1μg

pTNF-α-promoter-TA-luc(報(bào)告基因質(zhì)粒)1μg

pCMV-Blank1μg

pCMV-C-BFP(藍(lán)色熒光蛋白)1μg

pCMV-C-CFP(青色熒光蛋白)1μg

pCMV-C-DsRed(紅色熒光蛋白)1μg