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惡性多發(fā)性畸胎瘤細胞;NTERA-2培養(yǎng)操作步驟

時間:2024/11/27閱讀:226
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惡性多發(fā)性畸胎瘤細胞;NTERA-2培養(yǎng)操作步驟 :

1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布; 

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片); 

3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時; 

4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中; 

5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。 


6.快速固定步驟需謹慎操作,以避免細胞形態(tài)的改變或抗原的損失。將取出的蓋玻片置于含有4%多聚甲醛的固定液中,室溫下固定10-15分鐘。固定時間不宜過長,以防細胞結構過度硬化。

7.固定完成后,用PBS(磷酸鹽緩沖液)漂洗蓋玻片3次,每次5分鐘,以去除殘留的固定液。此步驟對于后續(xù)的免疫染色至關重要,能有效減少背景噪音。

8.接下來進行通透化處理,使用0.1% Triton X-100溶液處理蓋玻片10分鐘,使細胞膜通透性增加,便于抗體進入細胞內與抗原結合。

9.通透后,再次用PBS漂洗3次,隨后進行封閉處理,用含5%胎牛血清的PBS封閉液覆蓋蓋玻片,室溫孵育30分鐘,以減少非特異性抗體結合。

10.最后,根據(jù)實驗需求選擇合適的特異性抗體進行免疫染色,并按照抗體說明書推薦的步驟進行孵育、洗滌、顯色等操作,直至完成整個免疫細胞化學檢測流程。通過顯微鏡觀察染色結果,分析惡性多發(fā)性畸胎瘤細胞NTERA-2的形態(tài)學特征及相關蛋白表達情況。


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