細胞簡介：

小鼠雪旺氏分離神經(jīng)組織；周圍神經(jīng)系統(tǒng)中的神經(jīng)膠質(zhì)細胞稱施萬（schwann，又名雪旺細胞）細胞，它沿神經(jīng)元的突起分布。施萬細胞包裹在神經(jīng)纖維上，這種神經(jīng)纖維叫有髓神經(jīng)纖維。有髓神經(jīng)纖維和無髓神經(jīng)纖維的施萬細胞的形態(tài)和功能有所差異，施萬細胞的外表面有基膜，能分泌神經(jīng)營養(yǎng)因子，促進受損的神經(jīng)元的存活及其軸突的再生，參與周圍神經(jīng)系統(tǒng)中神經(jīng)纖維的構成。施萬細胞的胞核呈長卵圓形，其長軸與軸突平行，核周有少量胞質(zhì)。由于施萬細胞包在軸突的外面，故又稱神經(jīng)膜細胞（neurilemmalcell），它的外面包有一層基膜。施萬細胞最外面的一層胞膜與基膜一起往往又稱神經(jīng)膜（neurilemma），光鏡下可見此膜。在有髓神經(jīng)纖維發(fā)生中，伴隨軸突一起生長的施萬細胞表面凹陷成一縱溝，軸突位于縱溝內(nèi)，溝緣的胞膜相貼形成軸突系膜（mesaxon）。軸突系膜不斷伸長并反復包卷軸突，把胞質(zhì)擠至細胞的內(nèi)、外邊緣及兩端（即靠近郎氏結處），從而形成許多同心圓的螺旋膜板層，即為髓鞘。故髓鞘乃成自施萬細胞的胞膜，屬施萬細胞的一部分。施萬細胞的胞質(zhì)除見于細胞的外、內(nèi)邊緣和兩端外，還見于髓鞘板層內(nèi)的施－蘭切跡。該切跡構成螺旋形的胞質(zhì)通道，并與細胞外、內(nèi)邊緣的胞質(zhì)相通。
方法簡介：

公司實驗室分離的小鼠雪旺氏采用yi蛋白酶-膠原酶混合消化法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測：

公司實驗室分離的小鼠雪旺氏經(jīng)S-100免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

1) 將5-10d的乳鼠浸泡入75%乙醇中，移入生物安全柜，

2) 從胸部解剖乳鼠，取出雙肺置于預冷的PBS中，盡可能的除去結締組織等，

3) 取肺邊緣部分，剪碎，將組織塊移入T25培養(yǎng)瓶中，倒置于細胞培養(yǎng)箱中，

4) 2h后，培養(yǎng)瓶中注入2 mL內(nèi)皮培養(yǎng)基，小心將培養(yǎng)瓶正置于培養(yǎng)箱，確保組織塊不會飄起來，

5) 每3d換液2mL，待細胞從組織塊中爬出來后，隔2d換液，待細胞融合達到60-70%左右時，去除組織塊，將肺微血管內(nèi)皮細胞重新鋪瓶。

1、您收到細胞后，請按照以下方法進行操作：

取出T-25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置4-6小時或過夜，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)，然后換用新鮮培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進行傳代。

2、細胞傳代：

1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；

2）添加0.125%消化液約2ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1500rpm/min，離心5min；

3）棄上清，沉淀細胞用12ml培養(yǎng)基重懸，然后按1:2比例進行分瓶傳代，放入37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4）待細胞貼壁后，觀察培養(yǎng)結果，之后進行換液培養(yǎng)或傳代。

3、細胞凍存：

1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；

2）添加0.125%消化液約2ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后輕輕吹打細胞使之脫落，再加入培養(yǎng)液終止消化，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1500rpm/min，離心5min；

3）用適當量的凍存液（基礎培養(yǎng)基：FBS：DMSO=7:2:1）重懸細胞，并放置于凍存管中；

4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h后轉入液氮中進行長期保存。

4、細胞復蘇：

1）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具）， 快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；

2）將凍存管中的細胞移至15ml無菌離心管中，滴加入培養(yǎng)液5ml混勻細胞，然后將細胞懸液轉移至適當面積大小的培養(yǎng)皿中；

3）放置于37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4）第二天，換用新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。