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閱讀:131發(fā)布時(shí)間:2017-6-5
ELISA試劑盒以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在臨床上得到了廣泛的使用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)實(shí)驗(yàn)的檢查作用影響較大,如不留意,有也許致使顯色不全、花板等成果。
將操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的因素及解決辦法總結(jié)于下,以期給同行帶來一些啟示,進(jìn)步實(shí)驗(yàn)質(zhì)量。
下面剖析Elisa實(shí)驗(yàn)操作中也許影響成果的因素,并給出相應(yīng)的解決辦法一、挑選試劑
挑選質(zhì)量的檢查試劑,嚴(yán)厲依照試劑闡明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
二、加樣
也許因素:
1)血清或血漿標(biāo)本別離欠好即進(jìn)行加樣; 2)手工操作中,加樣板過多形成加樣后放入孵箱前等待時(shí)刻過長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺起孔外。
解決辦法:
1)ELISA試劑盒標(biāo)本為血清:將血液先天然寄存1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:有必要使用含抗凝劑的血液標(biāo)本搜集管,采血后有必要立即倒置*混合5-10次,放置一段時(shí)刻后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢查,可放在2-8℃冰箱中,若要儲(chǔ)存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。 2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板外表輕拭吸干。 4) 假如選用AT或別的全自動(dòng)加樣,挑選FAME或別的后處理儀器加酶試劑。 5) 標(biāo)本較多時(shí),請(qǐng)分批操作。
三、 孵育
也許因素:
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸騰,吸附于孔壁,難于清潔*; 2) 孵育時(shí)刻人為延伸,致使非特異性緊附于反響孔周圍,難以清潔*。
解決辦法:
1) 貼封片或加蓋; 2) 按闡明步驟嚴(yán)厲控制操作時(shí)刻。
四、洗板
也許因素:
1) 選用手工洗板,孔與孔之間液體穿插。 2) 選用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量缺乏,致使洗板不*;洗板針阻塞,抽吸不*;洗板不暢,致使洗板作用差。 3) 反響板過多形成洗板等待時(shí)刻長(zhǎng)。
解決辦法:
1)ELISA試劑盒保證洗液注滿各孔,洗板針疏通,洗完板后在吸水紙(挑選潔凈、無或少塵的吸水資料)上輕輕拍干; 2) 合理安排,或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
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