將全部ATCC細(xì)胞固定打孔。每管加入 150 μL 固定破膜劑，震蕩混勻，4℃ 避光孵育 20 min。

ICS Wash Buffer 液洗滌，用法同 Wash Buffer 液。

在相應(yīng)的需要進(jìn)行胞內(nèi)染色的樣本中加入適當(dāng)量胞內(nèi)染色抗體（如 APC IFN-γ抗體），4℃ 孵育 30 min 或室溫避光孵育 15 min。ICS Wash Buffe 液洗滌，1 500 rpm 離心 5 min。

棄離心上清液，根據(jù)實(shí)際情況加入 200 μL 或者 300 μL Wash Buffer 液重懸。

震蕩混勻，流式上機(jī)。

 注意事項(xiàng)

每一步離心倒掉上清時(shí)可以先在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪幾層平板紙，傾倒上清后可吸掉管口的液體。

為了避免打孔劑對(duì)細(xì)胞形態(tài)的影響從而影響后續(xù)圈門(mén)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，所以不管是否需要胞內(nèi)染色，每個(gè)樣本都需要打孔。

染色時(shí)抗體的加入量可根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整，為避免抗體濃度對(duì)染色的影響，樣品染色體系不得大于 100 μL。為減少染色時(shí)加樣的誤差，可配置表面染色抗體稀釋液，雙染或多色染色可把多種抗體稀釋到一管中。按 10 μL 或5 μL 體系，用 Wash Buffer 液稀釋。

為了避免游離抗體的結(jié)合出現(xiàn)假陽(yáng)性，可洗滌兩次。

檢測(cè)的ATCC細(xì)胞量不能過(guò)少也不能過(guò)多，細(xì)胞太少檢測(cè)時(shí)樣本流量會(huì)增大影響變異系數(shù)，細(xì)胞過(guò)多，可能會(huì)導(dǎo)致抗體或染料相對(duì)不足，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
187393-00-6    Bemotrizinol    雙-乙基乙氧*甲氧苯基三嗪標(biāo)準(zhǔn)品    200mg
73-48-3    Bendroflumethiazide    芐氟噻嗪標(biāo)準(zhǔn)品    200mg
5987-82-6    Benoxinate Hydrochloride    *標(biāo)準(zhǔn)品    200mg
132-17-2    Benztropine Mesylate    甲磺酰苯扎托品標(biāo)準(zhǔn)品    200mg
5579-84-0    Betahistine Hydrochloride    *標(biāo)準(zhǔn)品    200mg
590-46-5    Betaine Hydrochloride    鹽酸甜菜堿標(biāo)準(zhǔn)品    200mg
378-44-9    Betamethasone    *標(biāo)準(zhǔn)品    200mg
22298-29-9    Betamethasone Benzoate    苯甲酸*標(biāo)準(zhǔn)品    200mg
2152-44-5    Betamethasone Valerate    戊酸*標(biāo)準(zhǔn)品    200mg
63659-19-8    Betaxolol Hydrochloride    *標(biāo)準(zhǔn)品    200mg
ATCC細(xì)胞