干細胞轉(zhuǎn)染的開始——在轉(zhuǎn)染前12小時，將細胞分種于培養(yǎng)板中。在細胞達到50-80%的融合率時開始轉(zhuǎn)染，這樣就可以使它們在實驗結束時達到接近的融合。細胞對轉(zhuǎn)染復合物的攝取通常在0.5-6小時的時間內(nèi)完成。

轉(zhuǎn)染是否成功的影響因素很多，如需要轉(zhuǎn)染的細胞類型（對于困難的細胞系尤其如此），需要被轉(zhuǎn)染的分子（DNA、RNA、寡核苷酸、蛋白質(zhì)），轉(zhuǎn)染試劑等。但無論在何種情況下，轉(zhuǎn)染的成功均取決于轉(zhuǎn)染效率、低細胞毒性以及重現(xiàn)性這幾個要素。以下是幫大家搜集的關于細胞轉(zhuǎn)染的一些時間方面的問題及解答。

了解一下大家做細胞轉(zhuǎn)染時的幾個小細節(jié)：

1、對于293、293T這種貼壁不是很緊的細胞系，大家都是分了細胞之后多長時間做轉(zhuǎn)染呢？或者細胞長到那種密度做轉(zhuǎn)染呢？

2、轉(zhuǎn)染之后大家都是多久收細胞呢？或者是多大密度收細胞呢？

3、轉(zhuǎn)染之后的細胞如果很長時間不收，例如48h~72h不收細胞，轉(zhuǎn)進去的外源基因還有沒有表達呢？表達量怎么樣呢？

答：1, 鋪板24-48轉(zhuǎn)染 主要看你鋪的密度 想24H的話可以1W每孔

     2，脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染24H夠了，不過我們做的時候不收細胞，直接做flipr

     3, 48H還沒神馬問題的，72就不知道了

問：想在鋪板之后16h或者更短的時間內(nèi)做轉(zhuǎn)然可以嗎？用的是維格拉斯的VigoFect脂質(zhì)體？

答： 細胞鋪的密一點就行了，轉(zhuǎn)染的時間根據(jù)細胞的密度吧，我一般5000細胞每孔種入24孔板。待細胞長到60——70%的時候開始轉(zhuǎn)染，這個看細胞系，有的細胞長的快，種完后需要的時間短些。轉(zhuǎn)染完后我們做luciferase，都是24小時后收取細胞。

對于細胞轉(zhuǎn)染，一般在細胞中期轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染效率會相對高一些。這個時候的細胞狀態(tài)是的。對于HEK293T來說，一般轉(zhuǎn)染的時間是在傳代后24hr以內(nèi)。轉(zhuǎn)染后48hr，外源基因肯定是有表達的。至于72hr，應該也還是有表達的，可能表達量會很低，主要是這個時間點的細胞大部分都衰老了。建議293T收集細胞，在轉(zhuǎn)染后36-48hr收集。

時間進度

一般原則提示：要確保zui終結果的成功；建立一個合適的時間進度進行轉(zhuǎn)染實驗以保證您所需要的目的蛋白能得到表達。

轉(zhuǎn)染的開始——在轉(zhuǎn)染前12小時，將細胞分種于培養(yǎng)板中。在細胞達到50-80%的融合率時開始轉(zhuǎn)染，這樣就可以使它們在實驗結束時達到接近的融合。細胞對轉(zhuǎn)染復合物的攝取通常在0.5-6小時的時間內(nèi)完成。在這段時間后，就不會再發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染效率有所增長。

培養(yǎng)基更換——某些轉(zhuǎn)染試劑在攝取階段之后需要更換培養(yǎng)基。如果轉(zhuǎn)染必須在沒有胎牛血清存在的條件下進行，那么這一步驟就*。而對于可在血清存在的情況下使用的無毒性轉(zhuǎn)染試劑時，如果有足夠的培養(yǎng)基用于后續(xù)表達階段，就可以省略這一步。

如果將轉(zhuǎn)染復合物留在培養(yǎng)基中直到進行檢測，那么對有些細胞系而言轉(zhuǎn)染效率會有所提高，而另外一些細胞在轉(zhuǎn)染開始幾個小時之后其轉(zhuǎn)染效率就不會再有升高。雖然在轉(zhuǎn)染步驟之后轉(zhuǎn)染劑/DNA復合物通常不一定要從培養(yǎng)體系中清除，但在此后的*生長階段換用新鮮的培養(yǎng)基卻是必須的。如果轉(zhuǎn)染細胞需要生長3-7天，換培養(yǎng)基就尤其重要，這樣一來就使它們有時間達到zui高的蛋白表達量。

時間測定——轉(zhuǎn)染開始后的24-48小時內(nèi)，干細胞報告基因產(chǎn)物的濃度逐漸增加；而這種增加取決于增強子的強度、表達外源蛋白中所涉及的細胞反應，存活細胞的健康狀態(tài)，以及營養(yǎng)因素等。在轉(zhuǎn)染后等待3-7天收集蛋白進行純化較為常見了。

zui后就是平時可能會忽略的轉(zhuǎn)染試劑本身的脫靶效應off-target effect，轉(zhuǎn)染試劑本身對基因表達水平（高表達或低表達）的影響，有時候可能會造成假陽性的結果。
供HPLC法系統(tǒng)適用性    50mg    *雜質(zhì)Ⅰ    常溫，避光    *：    規(guī)格:
供鑒別用    100mg    *    常溫，避光    *：    規(guī)格:
供檢查用    50mg    反式*    常溫，避光    *：    規(guī)格:
供檢查用    50mg    去氟*    常溫，避光    *：    規(guī)格:
供檢查用    50mg    N-甲基*    常溫，避光    *：    規(guī)格:
供檢查用    50mg    4-羥基間苯二甲酸    常溫，避光    *：    規(guī)格:
供GC法含量    50mg    *    常溫，避光    *：    規(guī)格:
供檢查用    50mg    二*    常溫，避光    *：    規(guī)格:
供GC法含量    100mg    間甲酚    常溫，避光    *：    規(guī)格:
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