腫瘤細(xì)胞和樹鼩原代腎上皮細(xì)胞的生長(zhǎng)特性，發(fā)現(xiàn)樹鼩原代腎上皮細(xì)胞和 Ｖｅｒｏ 細(xì)胞在１５ ｄ 以內(nèi)可由對(duì)數(shù)生*至平臺(tái)期，并能在對(duì)數(shù)期維持一定的生長(zhǎng)活力，由此說(shuō)明樹鼩原代腎上皮細(xì)胞能夠充分滿足體外ＥＶ７１ 感染實(shí)驗(yàn)的條件。通過(guò) ＥＶ７１ 對(duì)樹鼩原代腎上皮細(xì)胞和 Ｖｅｒｏ 細(xì)胞感染 ４８ ｈ 后的核酸以及培養(yǎng)上清病毒載量的測(cè)定，結(jié)果是在感染樹鼩原代腎上皮細(xì)胞的培養(yǎng)上清中能明顯檢測(cè)到了病毒的擴(kuò)增條帶，這和陽(yáng)性對(duì)照的 Ｖｅｒｏ細(xì)胞結(jié)果一致。 并且再測(cè)定兩種細(xì)胞培養(yǎng)上清中的病毒載量時(shí)發(fā)現(xiàn)沒有存在顯著性的差異，且都要明顯地高于 ０ ｈ 的洗液，初步確立了 ＥＶ７１ 能夠較好地感染樹鼩原代腎上皮細(xì)胞，并且病毒能夠在細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行復(fù)制過(guò)程。 為了進(jìn)一步確定 ＥＶ７１ 在被感染細(xì)胞內(nèi)的感染和復(fù)制活動(dòng)，本研究通過(guò) Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 和免疫熒光分別檢測(cè)了細(xì)胞內(nèi)的 ＥＶ７１ 病毒蛋白 ＶＰ１ 和定位情況。 比較樹鼩原代腎上皮細(xì)胞和 Ｖｅｒｏ 細(xì)胞的結(jié)果，其能夠證明和 Ｖｅｒｏ 細(xì)胞一樣，在經(jīng) ＥＶ７１ 感染２ ｄ后開始，此后在不同時(shí)間段均能檢測(cè)到 ＶＰ１ 蛋白的持續(xù)存在，這和免疫熒光的檢測(cè)結(jié)果相吻合，說(shuō)明ＥＶ７１ 在感染樹鼩原代腎上皮細(xì)胞后的 ６ ～ ８ ｄ 內(nèi)病毒可持續(xù)存在并活動(dòng)。

通過(guò)本研究，我們成功分離并優(yōu)化了樹鼩原代腎上皮細(xì)胞的培養(yǎng)條件，得到較純且生長(zhǎng)狀態(tài)良好的原代腎上皮細(xì)胞，進(jìn)而成功建立了 ＥＶ７１ 的樹鼩體外細(xì)胞感染模型。 在進(jìn)行樹鼩的原代腎上皮細(xì)胞感染后，通過(guò)系統(tǒng)地評(píng)價(jià)其感染特性，根據(jù)被感染細(xì)胞中病毒的核酸和蛋白層面檢測(cè)結(jié)果，均能夠證明 ＥＶ７１ 可以感染樹鼩體外的原代腎上皮細(xì)胞，其特征和腫瘤細(xì)胞相符。 以上這些研究成果能夠?yàn)楹罄^進(jìn)一步深入的研究 ＥＶ７１ 的體外感染機(jī)制奠定基礎(chǔ)。 同時(shí)，ＥＶ７１對(duì)樹鼩體外感染模型的建立為將來(lái)細(xì)胞層面的藥物篩選提供了平臺(tái)，進(jìn)而也為樹鼩活體感染模型的研究提供必要的依據(jù)。
HPLC≥98%    trigonelline    胡蘆巴堿    20mg/支
HPLC≥98%    Daphnetin    *（祖師麻甲素）    20mg/支
HPLC≥98%    parthenolide    小白菊內(nèi)酯    20mg/支
HPLC≥98%    Polyphyllin A        20mg/支
HPLC≥98%    Polyphyllin B    重樓皂甙B    20mg/支
HPLC≥98%    Polyphyllin C    重樓皂甙C    20mg/支
HPLC≥98%    Polyphyllin E    重樓皂甙E    20mg/支
HPLC≥98%    Polyphyllin F    重樓皂甙F    20mg/支
HPLC≥98%        烏金甙    20mg/支
HPLC≥98%        獐牙菜甙    20mg/支
腫瘤細(xì)胞