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elisa免疫檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)操作注意事項(xiàng)

時(shí)間:2017/5/25閱讀:307
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1. elisa免疫檢測(cè)試劑盒正式試驗(yàn)時(shí),應(yīng)分別以陽(yáng)性對(duì)照與陰性對(duì)照控制試驗(yàn)條件,待檢樣品應(yīng)作一式二份,以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時(shí)本底較高,說(shuō)明有非特異性反應(yīng),可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。
2. 在ELISA中,進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的,其中包括:
(1) 固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進(jìn)行篩選:用等量抗原包被,在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng),觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時(shí),要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的Z適濃度需進(jìn)行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進(jìn)行包被后,在其它試驗(yàn)條件相同時(shí),觀察陽(yáng)性標(biāo)本的OD值。選擇OD值Z大而蛋白量Z少的濃度。對(duì)于多數(shù)蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō)通常為1~10μg/ml。
(3) 酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價(jià)的滴定(見(jiàn)酶標(biāo)記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法"(包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。
(4) 酶的底物及供氫體的選擇:對(duì)供氫體的選擇要求是價(jià)廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng),而本身無(wú)色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應(yīng)注意防護(hù)。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時(shí)間后,應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時(shí)間,以10-30分鐘為宜。elisa免疫檢測(cè)試劑盒底物使用液必須新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入。
人基質(zhì)金屬蛋白酶7(MMP-7)    規(guī)格:    96T/48T    Human Matrix metalloproteinase-7—MMP-7 ELISA kit    原裝、分裝    
人基質(zhì)金屬蛋白酶3(MMP-3)ELISA kit     規(guī)格:    96T/48T    Human Matrix metalloproteinase-3—MMP-3 ELISA kit    原裝、分裝    
人基質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP-2)    規(guī)格:    96T/48T    Human Matrix metalloproteinase-2—MMP-2 ELISA kit    原裝、分裝    
人基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP-13)    規(guī)格:    96T/48T    Human Matrix metalloproteinase-13—MMP-13 ELISA kit    原裝、分裝    
人基質(zhì)金屬蛋白酶10(MMP-10)    規(guī)格:    96T/48T    Human Matrix metalloproteinase-10—MMP-10 ELISA kit    原裝、分裝    
人基質(zhì)金屬蛋白酶1(MMP-1)    規(guī)格:    96T/48T    Human MMP-1——Matrix metalloproteinase-1 ELISA kit    原裝、分裝    
人巨噬細(xì)胞炎性蛋白-3β( MIP-3β)    規(guī)格:    96T/48T    Human Macrophage Inflammatory Protein-3β,MIP-3β ELISA kit    原裝、分裝    
人巨噬細(xì)胞炎性蛋白-3α(MIP-3α)    規(guī)格:    96T/48T    Human Macrophage Inflammatory Protein-3α,MIP-3α ELISA kit    原裝、分裝    
人巨噬細(xì)胞炎性蛋白-1β (MIP-1β)    規(guī)格:    96T/48T    Human Macrophage Inflammatory Protein-1β,MIP-1β ELISA kit    原裝、分裝    
人巨噬細(xì)胞炎性蛋白-1α ( MIP-1α)    規(guī)格:    96T/48T    Human Macrophage Inflammatory Protein-1α,MIP-1α ELISA kit    原裝、分裝    
人巨噬細(xì)胞來(lái)源的趨化因子(MDC)    規(guī)格:    96T/48T    Human Macrophage-Derived Chemokine,MDC ELISA KIT    原裝、分裝    
人巨噬細(xì)胞克隆刺激因子(M-CSF)    規(guī)格:    96T/48T    Human Macrophage Colony-Stimulating Factor,M-CSF ELISA kit    原裝、分裝    
人單核細(xì)胞趨化蛋白-3(MCP-3)    規(guī)格:    96T/48T    Human Monocyte chemotactic protein-3,MCP-3 ELISA kit    原裝、分裝    
人單核細(xì)胞趨化蛋白-2(MCP-2)    規(guī)格:    96T/48T    Human Monocyte chemotactic protein-2,MCP-2 ELISA kit    elisa免疫檢測(cè)試劑盒原裝、分裝    

 

 

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