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1. 其它elisa免疫檢測(cè)試劑盒成長(zhǎng)狀況和密度: 不要用通過屢次轉(zhuǎn)接或儲(chǔ)于4℃的培育的細(xì)菌,從-70℃或-20℃甘油保管的菌種中直接轉(zhuǎn)接用于制備感受態(tài)細(xì)胞的菌液.細(xì)胞成長(zhǎng)密度以剛進(jìn)入對(duì)數(shù)成長(zhǎng)期時(shí)為好,可通過監(jiān)測(cè)培育液的OD600 來(lái)操控.DH5α菌株的OD600 為0.5時(shí), 細(xì)胞密度在5×107 個(gè)/ml左右(不一樣的細(xì)菌狀況有所不一樣),這時(shí)對(duì)比適宜.密度過高或缺乏均會(huì)影響轉(zhuǎn)化功率.
2. 質(zhì)粒的質(zhì)量和濃度: 用于轉(zhuǎn)化的質(zhì)粒DNA應(yīng)主要是超螺旋態(tài)DNA(cccDNA).轉(zhuǎn)化功率與外源DNA的濃度在必定范圍內(nèi)成正比,但當(dāng)參加的外源DNA的量過多或體積過大時(shí),轉(zhuǎn)化功率就會(huì)下降.1ng的cccDNA即可使50μl 的感受態(tài)細(xì)胞到達(dá)飽滿.通常狀況下,DNA溶液的體積不該超越感受態(tài)細(xì)胞體積的5%.
3. 試劑的質(zhì)量: 所用的試劑,如CaCl2 等均需是Z高純度的(GR.或AR.),并用超純水制造,分裝保管于枯燥的冷暗處.
4. 避免雜菌和雜DNA的污染:整個(gè)操作進(jìn)程均應(yīng)在無(wú)菌條件下進(jìn)行, 所用器皿, 如離心管, tip*是新的,并經(jīng)高壓滅菌處置,一切的試劑都要滅菌,且注意避免被其它試劑、DNA酶或雜DNA所污染, 不然均會(huì)影響轉(zhuǎn)化功率或雜DNA的轉(zhuǎn)入, 為今后的挑選、判定帶來(lái)不必要的費(fèi)事.
本試驗(yàn)以E.coli DH菌株為受體細(xì)胞,并用CaCl2處置,使其處于感受態(tài),然后與pBS質(zhì)粒共保溫,完成轉(zhuǎn)化.因?yàn)閜BS質(zhì)粒帶有氨芐*抗性基因(Ampr ),其它elisa免疫檢測(cè)試劑盒可通過Amp抗性來(lái)挑選轉(zhuǎn)化子.如受體細(xì)胞沒有轉(zhuǎn)入pBS,則在含Amp的培育基上不能成長(zhǎng).能在Amp培育基上成長(zhǎng)的受體細(xì)胞(轉(zhuǎn)化子)必定已導(dǎo)入了pBS.轉(zhuǎn)化子擴(kuò)增后,可將轉(zhuǎn)化的質(zhì)粒提取出,進(jìn)行電泳、酶切等進(jìn)一步判定.
Mifepristone 84371-65-3 200mg 美服培酮標(biāo)準(zhǔn)品
Milbemycin Oxime 129496-10-2 200mg 米爾貝肟標(biāo)準(zhǔn)品
Milrinone 78415-72-2 500mg *標(biāo)準(zhǔn)品
Mineral Oil 8012-95-1 1.5ml 礦物油標(biāo)準(zhǔn)品
Minocycline Hydrochloride 13614-98-7 200mg 鹽酸二甲胺四環(huán)素標(biāo)準(zhǔn)品
Minoxidil 38304-91-5 125mg 敏諾西代標(biāo)準(zhǔn)品
Mirtazapine 85650-52-8 350mg *標(biāo)準(zhǔn)品
Mirtazapine Resolution Mixture 25mg *混合物標(biāo)準(zhǔn)品
Misoprostol 59122-46-2 100mg *標(biāo)準(zhǔn)品
其它elisa免疫檢測(cè)試劑盒
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