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人胚腎細(xì)胞;293 HEK-293操作步驟

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人胚腎細(xì)胞;293 [HEK-293]操作步驟
培養(yǎng)的前一周內(nèi)出現(xiàn)質(zhì)量問(wèn)題, 客戶可憑細(xì)胞的照片以及書(shū)面形式的細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程提供給我公司。 經(jīng)公司技術(shù)人員核實(shí)認(rèn)定為可以予以重發(fā)的情況,由公司再免費(fèi)提供一次細(xì)胞。

公司專注于細(xì)胞培養(yǎng)及細(xì)胞銷售的細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)研發(fā)的高科技企業(yè),主要擁有復(fù)蘇及凍存細(xì)胞及相關(guān)技術(shù)服務(wù),公司主要為細(xì)胞生命科學(xué)研究人員提供有效的、技術(shù)培訓(xùn)、人胚腎細(xì)胞;293 [HEK-293]操作步驟
售后服務(wù),其細(xì)胞主要來(lái)源ATCC、Riken、ScienCell、Invitrogen、ECACC、ACC等細(xì)胞庫(kù),以及部分國(guó)內(nèi)外細(xì)胞研究機(jī)構(gòu)建系。
細(xì)胞名稱 人胚腎細(xì)胞;293 [HEK-293]操作步驟
形態(tài)特性  上皮細(xì)胞
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性  293細(xì)胞是剪切過(guò)的人腺病毒5(Ad5)轉(zhuǎn)染的人胚腎細(xì)胞形成的永生化細(xì)胞。 此細(xì)胞包含并表達(dá)轉(zhuǎn)染的Ad5基因。 需在生物安全2級(jí)實(shí)驗(yàn)室操作。
培養(yǎng)條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%
傳代方法  消化3-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長(zhǎng)滿。
傳代情況 P(38+5)
凍存條件  *培養(yǎng)基+8%DMSO
支原體檢測(cè) 陰性
STR  Amelogenin:X;CSF1PO:12;D13S317:12,14;D16S539:9,13;D18S51:17,18;D19S433:15,18;D21S11:28,30.2;D2S1338:19;D3S1358:15,17;D5S818:8;D7S820:11,12;D8S1179:12,14;FGA:23;TH01:7,9.3;TPOX:11;vWA:16,19
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類人胚腎細(xì)胞;293 [HEK-293]操作步驟
處理方法
1、用75%的酒精消毒(建議配制75%酒精的水是經(jīng)過(guò)滅菌處理的)培養(yǎng)瓶外部。
2、肉眼觀察培養(yǎng)基,若出現(xiàn)渾濁情況,請(qǐng)及時(shí)。
3、將細(xì)胞置于顯微鏡下觀察,如有污染,請(qǐng)及時(shí)。
4、嚴(yán)格無(wú)菌操作,拆下封口膜,如果細(xì)胞的量較少,可放置溫箱中繼續(xù)培養(yǎng)。如果細(xì)胞量足夠,可進(jìn)行離心收集細(xì)胞,用1×PBS洗兩遍,加入新鮮培養(yǎng)液后置于37℃,5%CO 2的培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞密度達(dá)到80%以上或存在成團(tuán)現(xiàn)象,建議用0.25%*消化后傳代培養(yǎng)。
5、如果細(xì)胞為凍存狀態(tài),可將其繼續(xù)放入液氮中繼續(xù)保存。也可將其放入37℃的水浴中不時(shí)搖動(dòng),盡快解凍。解凍后,用75%酒精將凍存管擦拭干凈,用吸管吸出細(xì)胞懸液,放入培養(yǎng)瓶中,再加入相應(yīng)的細(xì)胞培養(yǎng)液,放于37℃培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。
人胚腎細(xì)胞;293 [HEK-293]操作步驟
細(xì)胞培養(yǎng)知識(shí):
1.應(yīng)如何避免細(xì)胞污染?
細(xì)胞污染的種類可分成細(xì)菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉?jié){菌。主要的污染原因?yàn)闊o(wú)菌操作技術(shù)不當(dāng)、操作室 環(huán)境不佳、污染之血清和污染之細(xì)胞等。嚴(yán)格之無(wú)菌操作技術(shù)、清潔的環(huán)境、與品質(zhì)良好之細(xì)胞來(lái)源和培養(yǎng) 基配制是減低污染之方法。
2.如果細(xì)胞發(fā)生微生物污染時(shí),應(yīng)如何處理?
直接滅菌后丟棄之。
3.購(gòu)買之細(xì)胞冷凍管經(jīng)解凍后,為何會(huì)發(fā)生細(xì)胞數(shù)目太少之情形?
研究人員在冷凍細(xì)胞之培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)細(xì)胞數(shù)目太少, 大都是因?yàn)殡x心過(guò)程操作上的失誤,造成細(xì)胞的物理性 損傷, 以及細(xì)胞流失。建議細(xì)胞解凍后不要立刻離心,應(yīng)待細(xì)胞生長(zhǎng)隔夜后再更換培養(yǎng)基即可。
4.購(gòu)買之細(xì)胞死亡或細(xì)胞存活率不佳可能原因?
研究人員在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)存活率不佳, 常見(jiàn)原因可歸納為:培養(yǎng)基使用錯(cuò)誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。血清使用 錯(cuò)誤或血清的品質(zhì)不佳。解凍過(guò)程錯(cuò)誤。冷凍細(xì)胞解凍后,加以洗滌細(xì)胞和離心。懸浮細(xì)胞誤認(rèn)為死細(xì)胞。培養(yǎng)溫度使用錯(cuò)誤。細(xì)胞置于-80℃太久。
5.收到之冷凍管瓶身破裂,瓶蓋有裂紋,或瓶蓋脫落之原因?
冷凍管瓶蓋裂紋,或瓶身破裂,可能是因?yàn)椴僮髡邐A取冷凍管時(shí)用力不當(dāng),造成冷凍管裂損,建議使用止血 鉗小心夾取。另冷凍管瓶蓋松動(dòng)或松脫,乃因熱脹冷縮之物理現(xiàn)象,冷凍管有可能因此而造成細(xì)胞污染,故冷凍管于放入和取出液氮桶時(shí),均應(yīng)立刻將冷凍管再一次扭緊。
Anti-FOSL1    FOSL1抗體 麥康凱瓊脂3號(hào)      Maconkey Agar No.3
Anti-FOSL2    FOSL2抗體 堿性瓊脂平板     Alkaline Agar
anti-FoxP1   FoxP1抗體 堿性膽鹽瓊脂     Alkaline Bile Salt Agar
Anti-FoxP3   叉頭蛋白3-T細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子 胰膘肉湯基礎(chǔ)     Tryptose Broth Base
anti-Measles virus of fusion protein   抗麻疹病毒抗體 豆粉瓊脂(血瓊脂基礎(chǔ))   Blood Agar Base
Anti-FSH    鼠抗人促卵泡生成素單克隆抗體 細(xì)菌L型增菌液 
anti-FSH-R   促卵泡刺激素受體抗體 細(xì)菌L型分離瓊脂 
Anti-G Protein   G蛋白/鳥(niǎo)苷酸結(jié)合蛋白抗體 溶血瓊脂基礎(chǔ) 
Anti-GABA-ARα1   γ1氨基丁酸受體α1抗體 龍膽紫血液瓊脂基礎(chǔ) 
anti-GABAB1   抗g-氨基丁酸B1受體抗體 改良羅氏培養(yǎng)基基礎(chǔ)     L-G medium Base,modified
anti-GABAB2   抗g-氨基丁酸B2受體抗體 酸性L-G培養(yǎng)基基礎(chǔ) Acid L-G medium Base
Anti-GAD-65    *脫羧酶-65抗體 堿性L-G培養(yǎng)基基礎(chǔ) Alkaline L-G medium Base
Anti-GAD-67    *脫羧酶-67抗體 TCH(噻吩-2-羧酸酰肼) 
Anti-Galanin   神經(jīng)節(jié)肽抗體“甘丙肽” 戊烷脒*瓊脂基礎(chǔ) 
Anti-Galectin-3   半乳糖凝集素-3抗體 *瓊脂基礎(chǔ) 
Anti-GAP-43    神經(jīng)生長(zhǎng)相關(guān)蛋白-43 指示選擇性培養(yǎng)基基礎(chǔ) 
Anti-GAPDH    3-磷酸甘油醛脫氫酶 PLET 瓊脂基礎(chǔ) PLET Agar Base
Anti-GASR   G蛋白偶聯(lián)受體-2抗體 戊烷脒 
Anti-Gastrin   胃泌素/蛙皮素抗體 炭疽桿菌疫苗 
Anti-Gax   生長(zhǎng)終止特異性同源盒基因抗體 炭疽桿菌沉淀血清 
Anti-GCS    *半*γ合成酶抗體 炭疽桿菌噬菌體 
anti-G-CSF   粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子抗體 炭疽桿菌診斷抗原 
anti-GDF-8   肌細(xì)胞生長(zhǎng)抑制素抗體 *敏感紙片 
Anti-GDNF    膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子抗體 印度墨汁 
Anti-Gelsolin   凝溶膠蛋白抗體 碘伏(液體) 
Anti-GFAP   膠質(zhì)纖維酸性蛋白抗體 * 
Anti-GFP    綠色熒光蛋白 美藍(lán)(亞甲基藍(lán)) 
Anti-GFRA4   GDNF家族受體α-4抗體 水楊素 
Anti-GFRα-1/GDNF   GDNF家族受體α-1抗體 MiddleBrook 7H10 瓊脂 MiddleBrook 7H10 Agar
Anti-GHR    生長(zhǎng)激素受體抗體 MiddleBrook 7H11 瓊脂 MiddleBrook 7H11 Agar
Anti-Ghrelin   腦腸肽抗體 氣單胞菌鑒別瓊脂  Aeromonas Differential Agar
Anti-GHRF/GHRH   生長(zhǎng)激素釋放激素因抗體 *肉湯 Arginine Broth acc. To Schubert
Anti-GIP    胃泌素抑制肽抗體 曲霉素瓊脂基礎(chǔ)(AFPA) 
Anti-GITR    糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)腫瘤壞死因子受體抗體 假單胞分離瓊脂 Pseudomonas Isolation Agar
Anti-Glasses Snake poison Protein   抗眼鏡蛇蛇毒蛋白抗體 假單胞分離肉湯 Pseudomonas Isolation Broth
Anti-GLI1   下游轉(zhuǎn)錄因子Gli1蛋白抗體 肌醇測(cè)定培養(yǎng)基 Inositol Assay Broth
Anti-GLP-1   胰高血糖素樣肽-1抗體 溴甲酚紫葡萄糖肉湯 Bromcresol Purple Dextrose Broth
Anti-GLP-2   胰高血糖素樣肽-2抗體 酸性肉湯 Acid Broth
Anti-GLUT1   葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1抗體 *測(cè)定培養(yǎng)基 Vitamin PP Assay Broth
 

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