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培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
操作方法：
1. 從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質?；蜻B接產(chǎn)物）并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時。

 α-GST 大鼠α*S轉移酶 規(guī)格： 48T/96T

 IFN-α 大鼠α干擾素 規(guī)格： 48T/96T

 AFU 大鼠αL巖藻糖苷酶 規(guī)格： 48T/96T

 α1-MG 大鼠α1微球蛋白 規(guī)格： 48T/96T

 α1-AGP 大鼠α1酸性糖蛋白 規(guī)格： 48T/96T

 TLR-9/CD289 大鼠Toll樣受體9 規(guī)格： 48T/96T

 TIEG1 大鼠TGF-β誘導早期基因1 規(guī)格： 48T/96T

 S-100 大鼠S100蛋白 規(guī)格： 48T/96T

 S-100B 大鼠S100B蛋白 規(guī)格： 48T/96T

 P-Selectin/CD62P 大鼠P選擇素 規(guī)格： 48T/96T

 P53 大鼠P53 規(guī)格： 48T/96T

大鼠N-乙?；?絲氨酰-天門冬酰-賴氨酰-* 大鼠N-乙?；?絲氨酰-天門冬酰-賴氨酰-* 規(guī)格： 48T/96T

 NAG 大鼠N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶 規(guī)格： 48T/96T

 NT-proBNP 大鼠N端前腦鈉素 規(guī)格： 48T/96T

 NT-proBNP 大鼠N端前腦鈉素 規(guī)格： 48T/96T

 PAL 大鼠L苯*解氨酶 規(guī)格： 48T/96T

 Flt3L 大鼠FMS樣*激酶3配體 規(guī)格： 48T/96T

 Flt3 大鼠FMS樣*激酶3 規(guī)格： 48T/96T

 E-Selectin/CD62E 大鼠E選擇素 規(guī)格： 48T/96T

 E-Cad 大鼠E鈣黏蛋白/上皮鈣黏蛋白 規(guī)格： 48T/96T

 CNP 大鼠C型鈉尿肽 規(guī)格： 48T/96T

 C-Peptide 大鼠C肽 規(guī)格： 48T/96T

 CRP 大鼠C反應蛋白 規(guī)格： 48T/96T

 CXCR3 大鼠CXC趨化因子受體3 規(guī)格1-碘代-4-硝基苯 30306-69-5

XL1-Blue 感受態(tài)細胞 100ul*502,6-二羥基苯甲酸 303-07-1

雙二甲基乙基醚 3033-62-3

2,3-二羥基苯甲酸 303-38-8

4-咪唑甲醛 3034-50-2

2-氯噻唑 3034-52-4

2-溴噻唑 3034-53-5

3-氧代戊酸甲酯 30414-53-0

3-氨基苯硼酸 30418-59-8

2-噻吩乙胺 30433-91-1

3-氟-4-溴-苯乙酮 304445-49-6

三乙基膦酰乙酸酯 30492-56-9

多聚甲醛 30525-89-4

丙縮二乙醇 3054-95-3

1,2,4-丁三醇 3068-00-6

分子篩 308080-99-1

2-氯-4,6-二甲基吡啶 30838-93-8

鈦酸乙酯 3087-36-3

N-叔丁氧羰基-L-* 1-芐酯 30924-93-7

Boc-L-天冬氨酸 1-芐酯 30925-18-9

4-氨基-2,5-二甲基* 3096-71-7

： 48T/96T

注意事項:
1. 產(chǎn)品僅用于科研感受態(tài)細胞在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。
2. 混入質?；蜻B接產(chǎn)物時應輕柔操作。
3. 轉化高濃度的質?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應減少Z終用于涂板的菌量。
操作步驟：
1．取感受態(tài)細胞置于冰浴中。一次轉化感受態(tài)細胞的建議用量為50-100可以根據(jù)實際情況分裝使用。以下實驗以50μl感受態(tài)細胞為例。
2．待感受態(tài)細胞融化后，向感受態(tài)細胞懸液中加入目的DNA（根據(jù)實際情況加入適量的DNA，通常100        μl感受態(tài)細胞能夠被1         ng超螺旋質粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
3．42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘
4．每個離心管中加入450μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，150rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復蘇
 5．根據(jù)實驗需求，取適量已轉化的感受態(tài)細胞，加到含相應抗生素的或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16小時。