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　　反向液相色譜法是色譜中的一種特種技術(shù)。應(yīng)用此法研究藥物在正常人體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)，具有簡(jiǎn)便，迅速，準(zhǔn)確等特點(diǎn)。RP-HPLC-UV的分析檢測(cè)方法，該方法不需要特殊的設(shè)備，而且分析方法的穩(wěn)定性好，精密度高，時(shí)間段，過程簡(jiǎn)單，可以作為藥物定量分析方法。自從反相液相色譜法應(yīng)用以來，有關(guān)此理論和實(shí)際應(yīng)用的文獻(xiàn)已經(jīng)大量出版。目前，反相液相色譜法已經(jīng)為許多實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)手段。

　　1.用藥后的房水進(jìn)行定量測(cè)量：

　　眼內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)：雙眼滴入眼液，將獲取的房水用反相液相色譜法進(jìn)行定量測(cè)量。結(jié)果滴眼后不同時(shí)間測(cè)定的房水中的藥物濃度不同，實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示局部點(diǎn)眼獲得的房水濃度低于對(duì)大多數(shù)真菌的低抑菌濃度說明單獨(dú)點(diǎn)眼效果不好。所以應(yīng)配合全身用藥，改進(jìn)用藥途徑增加眼內(nèi)穿透力，以及增加點(diǎn)眼次數(shù)來克服此弊端。因此頻繁點(diǎn)眼也是增加眼內(nèi)穿透性，縮短病程的重要手段。病例病程較長(zhǎng)滴眼次數(shù)過少可能事原因之一。

　　液相色譜儀在眼內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用

　　2.測(cè)量人體組織液中藥物濃度：

　　采用乙酸乙酯直接提取血漿樣品，操作簡(jiǎn)便，提取后樣品中雜質(zhì)干擾少，各藥物的萃取回收率高，均在75%以上，且通過有機(jī)溶劑的提取和濃縮，測(cè)定的靈敏度進(jìn)一步提高。由于乙酸乙酯比重較輕，與血漿混合后不易乳化，且液面處于上層，所以實(shí)驗(yàn)操作更方便。在進(jìn)行流動(dòng)相條件篩選時(shí)，考察不同配比的分離效果，發(fā)現(xiàn)在甲醇：水﹙65:35﹚時(shí)，各色譜峰及內(nèi)標(biāo)間分離效果好，且峰形尖銳，柱效高，完成一次測(cè)定只需15min。㏎選擇230nm波長(zhǎng)是經(jīng)過分析發(fā)現(xiàn)目標(biāo)成分在230nm紫外吸收系數(shù)均比較大，可以提高靈敏度。由于本方法流動(dòng)相中無緩沖鹽和改性試劑，因此測(cè)試過程中平衡和沖洗色譜系統(tǒng)的時(shí)間比較短，有利于提高測(cè)定效果，更合適臨床應(yīng)用。

　　3.藥物腹腔注射在家兔房水中的藥代動(dòng)力學(xué)研究：

　　測(cè)定腹腔注射藥物后不同時(shí)間家兔房水中的質(zhì)量濃度，計(jì)算其藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，研究藥代動(dòng)力學(xué)特點(diǎn)。關(guān)于樣品的處理和流動(dòng)相選擇，以甲醇處理樣品和選擇甲醇：水：磷酸緩沖液或甲醇：水為流動(dòng)相的報(bào)道較多。也有選用高氯酸處理血樣和甲醇：水：冰醋酸為流動(dòng)相的報(bào)道。我們采用高氯酸沉淀放水中的微量蛋白，一甲醇：水：冰醋酸=35:65:0.2為流動(dòng)相，色譜柱為Diamonsil C18不銹鋼柱，在波長(zhǎng)為250nm紫外光下對(duì)腹腔注射藥物量濃度的測(cè)定。通過高氯酸空白，防水空白和房水溶解藥物標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照測(cè)定，以及回收率測(cè)定為87.60％，日內(nèi)RSD為4.0％，日間RSD為5.32％，無其他峰干擾。結(jié)果表明，本方法具有特異，靈敏，快速等優(yōu)點(diǎn)，使用于對(duì)房水藥物質(zhì)量濃度的測(cè)量。

　　反相液相色譜法測(cè)定玻璃體腔內(nèi)N質(zhì)量濃度

　　4.藥物在玻璃體內(nèi)注射的藥代動(dòng)力學(xué)研究：

　　取玻璃體樣品，用反相液相色譜法測(cè)定玻璃體腔內(nèi)N質(zhì)量濃度。用DAS軟件計(jì)算主要的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。

　　增殖性玻璃體視網(wǎng)膜病變的治療主要是通過手術(shù)促使增生性病變的視網(wǎng)膜復(fù)位，但仍有10％左右的患者術(shù)后發(fā)生增殖性玻璃體視網(wǎng)病變。因?yàn)椴Ａw手術(shù)雖然能切除已形成的增生膜，但不能*取出增生細(xì)胞，甚至?xí)碳ぜ?xì)胞分化，增生，又形成增殖性玻璃體視網(wǎng)膜病變。所以，藥物防治增殖性玻璃體視網(wǎng)膜病變是非常必要的。近年來多種抗細(xì)胞增生藥或抗炎藥防治增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變的實(shí)驗(yàn)研究取得了一些進(jìn)展，主要有抗腫瘤，抗過敏，降血壓，酪氨酸激酶抑制劑等，但是目前在臨床上仍無理想藥物可供使用。