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細(xì)菌脂多糖(LPS)提取試劑盒100T實(shí)驗(yàn)方法

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更新時(shí)間:2017-07-05 11:22:11瀏覽次數(shù):303次

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細(xì)菌脂多糖(LPS)提取試劑盒100T實(shí)驗(yàn)方法儲(chǔ)存條件:2-8℃保存。

有效期:一年。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

脂多糖(LPS)是革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁外膜的主要成分,結(jié)構(gòu)很復(fù)雜、熱穩(wěn)定性*(在250℃下干熱滅菌2h才*滅活)。受LPS發(fā)現(xiàn)的歷史原因,如今LPS的概念幾乎等同于內(nèi)毒素(endotoxin)。LPS由多糖鏈和脂質(zhì)A組成,不同細(xì)菌間的多糖鏈?zhǔn)歉叨茸兓?,決定細(xì)菌的血清型;而脂質(zhì)A主要影響LPS的毒性作用。LPS可以引起免疫刺激的級(jí)聯(lián)反應(yīng)和機(jī)體的毒理活動(dòng),包括釋放內(nèi)毒素引起感染性休克從而導(dǎo)致末梢血管虛脫。臨床常通過(guò)檢測(cè)LPS的存在來(lái)診斷腦膜炎。

細(xì)菌脂多糖(LPS)提取試劑盒100T實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類(lèi)推;對(duì)于細(xì)胞懸液每50100 萬(wàn)細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 200×),按照每50μL JC-1200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽(yáng)性對(duì)照的設(shè)置:
    把試劑盒中提供的CCCP10mM )*按照1 1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線(xiàn)粒體膜電位的檢測(cè)。對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線(xiàn)粒體的膜電位會(huì)*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對(duì)于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時(shí)間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對(duì)于懸浮細(xì)胞:
1)取 1060 萬(wàn)細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 孵育20 分鐘。
3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液()加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(),并放置于冰浴。
437孵育結(jié)束后,600g 4 離心3 4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
5)用JC-1 染色緩沖液()洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液()重懸細(xì)胞,600g 4 離心34 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液()重懸細(xì)胞,600g 4 離心 34 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
6)再用適量 JC-1 染色緩沖液()重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計(jì)檢測(cè)或流式細(xì)胞儀分析。
細(xì)菌脂多糖(LPS)提取試劑盒100T實(shí)驗(yàn)方法注意事項(xiàng)
1)本試劑只適用于實(shí)驗(yàn),不適用于臨床檢測(cè);
2PIpropidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過(guò)皮膚吸收,對(duì)眼睛有刺激作用,使用時(shí)需戴手套;
3Annexin V-FITCPI是光敏物質(zhì),在操作時(shí)請(qǐng)注意避光。在處理和標(biāo)記時(shí),盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
4)整個(gè)操作過(guò)程動(dòng)作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請(qǐng)盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
6)為防止熒光衰變,宜在1小時(shí)內(nèi)進(jìn)行流式檢測(cè)。
7PI染色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)有可能造成檢測(cè)的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
可可Cocoa Theobromine 83-67-0 C7H8N4O2 98%

右旋四輕巴馬汀cright-hcndqdfourxy7nogqnbcrMcrtin320-14-720mg

毛冬青皂苷甲;毛冬青皂甙甲 Ilexsaponin A1 20mg HPLC98% 用于含量測(cè)定

HPLC法含量測(cè)定*100883-200601常溫,避光100mg

靈芝酸B Ganoderic acid B 81907-61-1 20mg HPLC98% 用于含量測(cè)定
298-46-4 *標(biāo)準(zhǔn)品 100mg

Hederagenin-3-O-α-L-Hederagenin-3-O-alpha-L-13320-27-HPLC98%;5mg/

Linarin 蒙花苷 480-36-4

Rebaudioside A 甜菊雙糖甙A標(biāo)準(zhǔn)品58543-16-1 300mg甜菊雙糖甙A標(biāo)準(zhǔn)品

白藜蘆醇;Resveratrol 501-36-0 20mg 訂購(gòu)|咨詢(xún)
水紅木Viburnum cylindricum Vibsanin C 葉含莢寧 C 74690-89-4 C25H36O5 95%

野柏合減Monocrotclinq312--020mg

人參皂苷Rb1;人參皂甙Rb1 Ginsenoside Rb1 41753-43-9 20mg HPLC98% 用于含量測(cè)定

標(biāo)準(zhǔn)品人胰島素140633-200302RP-HPLC法效價(jià)測(cè)定

扁蓄苷;萹蓄苷 Avicularin 572-30-5 20mg HPLC98% 暫無(wú)簡(jiǎn)介
大鼠足細(xì)胞標(biāo)記蛋白/足盂蛋白(PCX)ELISA試劑盒 ,英文名: PCX ELISA Kit

人糖皮質(zhì)激素受體α(GR-α)ELISA檢測(cè)試劑盒Humanglucocorticoidreceptor-α,GR-αELISAKit 96T/48T

大鼠單核細(xì)胞趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)免疫試劑盒 Rat monocyte chemotactic protein 1/monocyte chemotactic and activating factor,MCP-1/MCAF ELISA kit

CLIAKitforTRAIL-R1(Humantumornecrosisfactor-relatedapoptosis-inducingligand1)ELISAKit人腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體1規(guī)格:48T/96T

羥*(HYP)高效液相色譜定量檢測(cè)試劑盒20

ELISAKitAT人抗*規(guī)格:48T/96T
兔乙酰*受體抗體(AChRab)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Human fibrinogen (Fbg) ELISA Kit 人血纖蛋白原(Fbg)ELISA試劑盒

HumanCoxsackievirusIgG,CoxV-IgGELISAKit 人柯薩奇病毒IgG(CoxV-IgG)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumanFolicacid,FAELISA試劑盒人*(FA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

組織半*蛋白酶-1(PASE-1)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20

HumanNeurotensin,NISAKit人神經(jīng)降壓素(NT)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
細(xì)菌脂多糖(LPS)提取試劑盒100T實(shí)驗(yàn)方法人Ⅰ型膠原C端肽(CTX-)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人Ⅰ型膠原(Col)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

17-類(lèi)固醇(17-KS)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

17羥孕(17-OHP)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

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