細胞活性檢測試劑盒1000T售后服務(wù)使用注意事項
1．微量試劑取用前請離心集液。
2．7-AAD避光保存及使用。
3．7-AAD為潛在致癌物，操作時請采取防護措施，穿*、戴手套等。
4．本試劑盒適用于檢測活細胞，流式細胞儀檢測時，細胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105，，不*用于檢測組織樣本。
細胞活性檢測試劑盒1000T售后服務(wù)操作方法
1．懸浮細胞離心（2000rpm離心5min）收集；貼壁細胞用*消化收集用PBS洗滌細胞二次（2000rpm離心5min）收集1~5×105細胞；
2．加入5μL 7-AAD染液，混勻；室溫、避光、反應(yīng)5～15min；
3．加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細胞；
4．請在1 hour內(nèi)，進行下述熒光顯微鏡或流式細胞儀的觀察和檢測。
A．熒光顯微鏡觀察
1．滴一滴上述染色后的細胞懸液于載玻片上，并用蓋玻片蓋上細胞；
2．對于貼壁細胞來說，也可直接用蓋玻片來培養(yǎng)細胞并誘導(dǎo)細胞凋亡；
（1）將細胞于蓋玻片上生長，用適當?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細胞凋亡，并設(shè)立陰性對照組；
（2）用PBS洗滌細胞兩次；
（3）在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液，混勻；
（4）將上述溶液滴加于蓋玻片表面，使長有細胞的蓋玻片表面均勻覆蓋；
（5）避光、室溫反應(yīng)5 min。
3．將蓋玻片倒置于載玻片上，于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長546nm，發(fā)射波長647 nm，7-AAD熒光信號呈紅色。
B．流式細胞儀分析
用流式細胞儀檢測，激發(fā)波長Ex=546 nm; 發(fā)射波長Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測。
細胞活性檢測試劑盒1000T售后服務(wù)實驗步驟
貼壁細胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細胞。在消化時可加2％的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時，注意必須*清除EDTA：在標記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌，清除EDTA，以免殘余的EDTA與Ca2＋螯合，影響Annexin V的結(jié)合。
（1）用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer；
（2）細胞收集。懸浮細胞收集：離心5分鐘；貼壁細胞：用不含EDTA的*消化收集后（注：*消化時間不宜過長，否則會影響細胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合），于室溫2000rpm離心5～10分鐘，收集細胞；
（3）細胞洗滌：用預(yù)冷1×PBS（4℃）重懸細胞一次，2000rpm離心5～10分鐘，洗滌細胞；
（4）加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細胞；
（5）Annexin V-FITC標記：加入5μL的Annexin V-FITC混勻后，避光，室溫孵育15分鐘；
（6）PI標記：上機前5分鐘再加入5μL的PI染色。
（7）上機前，補加200μL的1×Binding Buffer。
DLD-1(人結(jié)腸腺癌細胞) 5×106cells/瓶×2

CM-H130人視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細胞*培養(yǎng)基100mL

IL1R1 Others Cynomolgus 食蟹猴 IL1R1 人細胞裂解液 (陽性對照)

MKN-28細胞，人胃癌細胞 人骨肉瘤細胞,U-2 OS細胞 幼蚊細胞;C6/36

人胃腺癌細胞;BGC-823

CA9 Others Human 人 CA9 / CAIX 人細胞裂解液 (陽性對照)
人骨骼肌衛(wèi)星細胞cDNAHSkMSC cDNA

IL12A Others Cynomolgus 食蟹猴 / 恒河猴 IL12A / NKSF1 人細胞裂解液 (陽性對照)

tTA基因修飾的小鼠畸胎瘤細胞(B類);P19-CAG-tTA-3C8

小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細胞;PUMC-mips-A5 *(含100mL 酶解緩沖液) 10mL

細胞名稱 種屬

AGER Others Human 人 AGER / RAGE 人細胞裂解液 (陽性對照)
GREM1 Others Mouse 小鼠 Gremlin 1 / GREM1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)

人B淋巴細胞瘤細胞;RAMOS

CL-0445Sp2/0-Ag14(小鼠骨髓瘤細胞)5×106cells/瓶×2

MM, 小鼠小膠質(zhì)細胞 R3細胞 C2C12(人肌肉成纖維細胞瘤)

人細胞;Hela 229 [HeLa229]

SMYD3 Others Human 人 SMYD3 / ZMYND1 人細胞裂解液 (陽性對照)
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