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Lillie二價(jià)鐵染色試劑盒2X50ml實(shí)驗(yàn)方法

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Lillie二價(jià)鐵染色試劑盒2X50ml實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對(duì)于細(xì)胞懸液每50100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 200×),按照每50μL JC-1200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對(duì)照的設(shè)置:
    把試劑盒中提供的CCCP10mM )*按照1 1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線粒體膜電位的檢測(cè)。對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會(huì)*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對(duì)于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時(shí)間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對(duì)于懸浮細(xì)胞:
1)取 1060 萬細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 孵育20 分鐘。
3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液()加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(),并放置于冰浴。
437孵育結(jié)束后,600g 4 離心3 4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
5)用JC-1 染色緩沖液()洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液()重懸細(xì)胞,600g 4 離心34 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液()重懸細(xì)胞,600g 4 離心 34 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
6)再用適量 JC-1 染色緩沖液()重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計(jì)檢測(cè)或流式細(xì)胞儀分析。
Lillie二價(jià)鐵染色試劑盒2X50ml實(shí)驗(yàn)方法注意事項(xiàng)
1)本試劑只適用于實(shí)驗(yàn),不適用于臨床檢測(cè);
2PIpropidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對(duì)眼睛有刺激作用,使用時(shí)需戴手套;
3Annexin V-FITCPI是光敏物質(zhì),在操作時(shí)請(qǐng)注意避光。在處理和標(biāo)記時(shí),盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
4)整個(gè)操作過程動(dòng)作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請(qǐng)盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
6)為防止熒光衰變,宜在1小時(shí)內(nèi)進(jìn)行流式檢測(cè)。
7PI染色時(shí)間過長(zhǎng)有可能造成檢測(cè)的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
QGY-7701(人肝癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

非洲綠猴腎細(xì)胞系/HCV-NS4B;Vero-HCV-NS4B

REG3B Others Mouse 小鼠 REG3B / Pap1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)

NCI-H520細(xì)胞,人肺鱗癌細(xì)胞 小鼠間質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞,MLTC-1細(xì)胞 CM-R023大鼠淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

人成纖維細(xì)胞HMF

Promocell C-28040 Pericyte Growth Medium, 周細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基 500ml
人真皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞cDNAHDMEC cDNA

HDAC8 Others Mouse 小鼠 HDAC8 / HDACL1 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)

KM小鼠未分化神經(jīng)膠質(zhì)瘤瘤株;B22

ZR-75-30細(xì)胞,癌細(xì)胞 人食管癌細(xì)胞,TE-11細(xì)胞 中國(guó)倉鼠卵巢細(xì)胞K1(亞系克隆);CHO-K1

小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞;PUMC-mips-B6

ERBB2 Others Human ErbB2 / HER2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)
EFNB2 Others Canine Ephrin-B2 / EFNB2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)

人肝細(xì)胞;QSG-7701 [QSG7701]

獼猴皮膚細(xì)胞;MMS7

LOVE1細(xì)胞,結(jié)直腸癌細(xì)胞 人黑色素瘤細(xì)胞,B16細(xì)胞 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;HH-29

HCC827(人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

ARSA Others Human ARSA / Arylsulfatase A 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)
大鼠*型纖溶酶原激活物(uPA)ELISA試劑盒 ,英文名: uPA ELISA Kit

人心肌轉(zhuǎn)錄因子GATA4ELISA檢測(cè)試劑盒Humancardiactranscriptionfactor-GATA4ELISAKit 96T/48T

魚多巴胺(DA)免疫試劑盒 Fish dopamine,DA ELISA kit

CLIAKitforPCT(HumanProcalcitonin)ELISAKit人降鈣素原規(guī)格:48T/96T

樹脂法DNA萃取試劑盒20

ELISAKitC3b人補(bǔ)體片斷3b規(guī)格:48T/96T
小鼠白介素1β (IL-1β)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Rat mammary carcinoma marker-ca153 -CA153ELISA 大鼠癌標(biāo)志物-CA153ELISA試劑盒

Humancalcitoningenerelatedpeptide,CGRPELISAKit 人降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humancardiactroponin,cTn-ELISA試劑盒人心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTn-)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品35S基因檢測(cè)試劑盒20

HumanSolubleClusterofdifferentiation21,sCD21ELISAKit人可溶性CD21(CR2/sCD21)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Lillie二價(jià)鐵染色試劑盒2X50ml實(shí)驗(yàn)方法人未甲基化寡聚脫氧核苷酸(CpG-ODN)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人維生素K1(VK1)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人維生素E(VE)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人維生素D受體(VDR)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

 

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