丙酮酸檢測試劑盒100T使用說明書注意事項
（1）本試劑只適用于實驗，不適用于臨床檢測；
（2）PI（propidium iodide，碘化丙錠）有毒性，能通過皮膚吸收，對眼睛有刺激作用，使用時需戴手套；
（3）Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì)，在操作時請注意避光。在處理和標(biāo)記時，盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段，用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后，在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察；
（4）整個操作過程動作要盡量輕柔，勿用力吹打細(xì)胞，盡量在4℃下操作，以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
（5）在細(xì)胞洗滌的后一步，請盡量將上清棄凈，以免PBS殘留，有可能會影響實驗結(jié)果。
（6）為防止熒光衰變，宜在1小時內(nèi)進(jìn)行流式檢測。
（7）PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高，建議首*行Annexin V-FITC染色，短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
丙酮酸檢測試劑盒100T使用說明書實驗操作步驟：
1、液的配制：
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ，其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推；對于細(xì)胞懸液每50～100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 （200×），按照每50μL JC-1（200×）加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液（5 ×），混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置：
    把試劑盒中提供的CCCP（10mM ）*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中，稀釋至10uM ，處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ，進(jìn)行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細(xì)胞，通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失，JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光；而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細(xì)胞，CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同，需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對于懸浮細(xì)胞：
（1）取 10～60 萬細(xì)胞，重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中，細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
（2）加入 0.5mL JC-1 染色工作液，顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
（3）在孵育期間，按照每 1mL JC-1 染色緩沖液（5×）加入 4mL 蒸餾水的比例，配制適量的JC-1 染色緩沖液（1×），并放置于冰浴。
（4）37℃孵育結(jié)束后，600g 4 ℃離心3 ～4 分鐘，沉淀細(xì)胞。棄上清，注意盡量不要吸除細(xì)胞。
（5）用JC-1 染色緩沖液（1×）洗滌 2 次：加入 1mL JC-1 染色緩沖液（1×）重懸細(xì)胞，600g 4 ℃離心3～4 分鐘，沉淀細(xì)胞，棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液（1×）重懸細(xì)胞，600g 4 ℃離心 3～4 分鐘，沉淀細(xì)胞，棄上清。
（6）再用適量 JC-1 染色緩沖液（1×）重懸后，用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察，也可以用熒光分光光度計檢測或流式細(xì)胞儀分析。
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INS-1(大鼠胰島細(xì)胞瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

人卵巢成纖維細(xì)胞HOF

SHH Others Mouse 小鼠 SHH / Sonic hedgehog 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

JEG-3/VP16-IL-2細(xì)胞，白介素-2轉(zhuǎn)染耐VP16絨癌細(xì)胞 兔角膜后基質(zhì)層成纖維細(xì)胞,RCBBF細(xì)胞 人羊膜間充質(zhì)基質(zhì)細(xì)胞HAMSC

CM-R033大鼠肝實質(zhì)細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

A172(人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CM-H107人軟骨細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL 人胚腎二倍體細(xì)胞;CCC-HEK-1
狗腎惡性組織細(xì)胞增生癥細(xì)胞;DH82

FGFR2 Others Human 人 FGFR2 / CD332 (aa 400-821) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

CL-0113HO-8910(人卵巢癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

THP-1人單核白血病細(xì)胞 低分化結(jié)腸腺癌細(xì)胞,HCT-116細(xì)胞 SK-MES-1(肺鱗癌細(xì)胞)

小鼠源細(xì)胞

HA Others H7N7 甲型流感 H7N7 (A/chicken/Netherlands/1/03) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
PGA4 Others Human 人 PGA4 / Pepsinogen A 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

人胚肺成纖維細(xì)胞;MRC-5

Hce-8693 人盲腸腺癌細(xì)胞(未分化)

293T人胚腎細(xì)胞 Human embryonic kidney cell line 293T 人胚腎細(xì)胞

CD40LG Protein Human 重組人 CD40L / CD154 / TNFSF5 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

人臍帶動脈平滑肌細(xì)胞 (HUASMC)( 5×105 ) A-375 [A375], 人惡性黑素瘤細(xì)胞株 Human
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