1X PBS緩沖液 (pH7.4)500ml實驗方法使用注意事項
1．微量試劑取用前請離心集液。
2．7-AAD避光保存及使用。
3．7-AAD為潛在致癌物，操作時請采取防護措施，穿*、戴手套等。
4．本試劑盒適用于檢測活細胞，流式細胞儀檢測時，細胞數(shù)量不以應低于1×105，，不*用于檢測組織樣本。
1X PBS緩沖液 (pH7.4)500ml實驗方法操作方法
1．懸浮細胞離心（2000rpm離心5min）收集；貼壁細胞用*消化收集用PBS洗滌細胞二次（2000rpm離心5min）收集1~5×105細胞；
2．加入5μL 7-AAD染液，混勻；室溫、避光、反應5～15min；
3．加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細胞；
4．請在1 hour內(nèi)，進行下述熒光顯微鏡或流式細胞儀的觀察和檢測。
A．熒光顯微鏡觀察
1．滴一滴上述染色后的細胞懸液于載玻片上，并用蓋玻片蓋上細胞；
2．對于貼壁細胞來說，也可直接用蓋玻片來培養(yǎng)細胞并誘導細胞凋亡；
（1）將細胞于蓋玻片上生長，用適當?shù)牡蛲稣T導劑誘導細胞凋亡，并設立陰性對照組；
（2）用PBS洗滌細胞兩次；
（3）在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液，混勻；
（4）將上述溶液滴加于蓋玻片表面，使長有細胞的蓋玻片表面均勻覆蓋；
（5）避光、室溫反應5 min。
3．將蓋玻片倒置于載玻片上，于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長546nm，發(fā)射波長647 nm，7-AAD熒光信號呈紅色。
B．流式細胞儀分析
用流式細胞儀檢測，激發(fā)波長Ex=546 nm; 發(fā)射波長Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測。
1X PBS緩沖液 (pH7.4)500ml實驗方法實驗步驟
貼壁細胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細胞。在消化時可加2％的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時，注意必須*清除EDTA：在標記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌，清除EDTA，以免殘余的EDTA與Ca2＋螯合，影響Annexin V的結(jié)合。
（1）用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer；
（2）細胞收集。懸浮細胞收集：離心5分鐘；貼壁細胞：用不含EDTA的*消化收集后（注：*消化時間不宜過長，否則會影響細胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合），于室溫2000rpm離心5～10分鐘，收集細胞；
（3）細胞洗滌：用預冷1×PBS（4℃）重懸細胞一次，2000rpm離心5～10分鐘，洗滌細胞；
（4）加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細胞；
（5）Annexin V-FITC標記：加入5μL的Annexin V-FITC混勻后，避光，室溫孵育15分鐘；
（6）PI標記：上機前5分鐘再加入5μL的PI染色。
（7）上機前，補加200μL的1×Binding Buffer。
Psi2 DAP(小鼠胚胎成纖維細胞) 5×106cells/瓶×2

表皮角化細胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml)

CEACAM1 Others Rat 大鼠 CEACAM1 / CD66a 人細胞裂解液 (陽性對照)

VE細胞，人血管內(nèi)皮細胞 小鼠骨髓瘤細胞,NS-1細胞 人臍靜脈內(nèi)皮細胞cDNAHUVEC cDNA

小鼠胰腺癌細胞(B類);Pan02

DU 145(人前列腺癌細胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0230Tca-8113(人舌鱗癌細胞)5×106cells/瓶×2 敘利亞倉鼠細胞系;Syrian Hamster AV12
恒河猴胚腎細胞;FRhK-4 [FRhK4]

F9 Others Mouse 小鼠 Coagulation Factor IX / FIX / F9 人細胞裂解液 (陽性對照)

HL-60 人原髓細胞白血病細胞

COLO 320DM 人結(jié)直腸腺癌細胞 COLO 320DM human colorectal adenocarcinoma cells RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS

PGF Protein Mouse 重組小鼠 PIGF / PLGF 蛋白

大鼠周神經(jīng)成纖維細胞(RPNF)(5×105) HEC-1A, 人子宮內(nèi)膜癌細胞系 Human
人腸平滑肌細胞(HISMC)( 5×105 )

人皮膚成纖維樣細胞;HSF2

CL-0366IAR20(大鼠肝細胞)5×106cells/瓶×2

人肺癌細胞;A-427 [A427] 大鼠破骨細胞*培養(yǎng)基 100mL

EL4.IL-2 小鼠淋巴瘤細胞

MET Others Mouse 小鼠 c-MET / HGFR 人細胞裂解液 (陽性對照)
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