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更新時間:2017-07-10 09:27:15瀏覽次數(shù):140次
聯(lián)系我時,請告知來自 儀表網(wǎng)酵母蛋白提取試劑盒(無去垢劑)50T免費代測實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細胞懸液每50~100 萬細胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應呈綠色熒光;而正常的細胞經JC-1 染色后應顯示紅色熒光。對于特定的細胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關文獻資料決定。
3、對于懸浮細胞:
(1)取 10~60 萬細胞,重懸于 0.5mL 細胞培養(yǎng)液中,細胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細胞。棄上清,注意盡量不要吸除細胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細胞儀分析。
酵母蛋白提取試劑盒(無去垢劑)50T免費代測注意事項
(1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質,在操作時請注意避光。在處理和標記時,盡可能在暗處進行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細胞標記后,在暗室內用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細胞,盡量在4℃下操作,以免影響細胞狀態(tài)。
(5)在細胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內進行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
CCL2 Protein Mouse 重組小鼠 CCL2 / MCP-1 / MCP1 蛋白 (His 標簽)
人胰島β細胞*培養(yǎng)基 100mL
FIGF Others Mouse 小鼠 VEGF-D / VEGFD / FIGF 人細胞裂解液 (陽性對照)
RD細胞,人惡性胚胎橫紋肌瘤細胞 屎腸球菌 艾氏腹水瘤瘤株;Ehrlich
豹貓肺成纖維樣細胞;LCL2
MADB106(大鼠癌細胞) 5×106cells/瓶×2 食蟹猴 CD2 人細胞裂解液 (陽性對照)
人小腦顆粒細胞裂解物HCGCL
EPCAM Others Rat 大鼠 EpCAM / TROP-1 / TACSTD1 人細胞裂解液 (陽性對照)
人晶狀體上皮細胞*培養(yǎng)基 100mL
NRK-52E細胞,大鼠腎細胞 HEL(紅白血病細胞) 豬腎細胞;PK-15
EFNA3 Protein Human 重組人 Ephrin-A3 / EFNA3 / EFL2 蛋白 (Fc 標簽)
D283 Med(人腦髓母細胞瘤細胞) 5×106cells/瓶×2 腸粘膜上皮細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
TNFRSF19 Others Human 人 TNFRSF19 / TROY 人細胞裂解液 (陽性對照)
人癌細胞;MDA-MB-231
狗脂肪間質干細胞 The dog adipose mesenchymal stem cells
HOPC-os細胞,人少突膠質前體細胞 構巢曲霉 人胚腎細胞;293 [HEK-293]
SW 1353(人骨肉瘤細胞) 5×106cells/瓶×2
HFL1(人肺成纖維細胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0466WI38/VA13(SV-40Z轉化肺成纖維細胞)5×106cells/瓶×2 人張氏肝細胞;Chang liver
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