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Western轉(zhuǎn)移緩沖液(5×),尼龍膜500ml實驗方法

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更新時間:2017-07-10 09:36:36瀏覽次數(shù):159次

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Western轉(zhuǎn)移緩沖液(5×),尼龍膜500ml實驗方法實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細胞懸液每50100 萬細胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 200×),按照每50μL JC-1200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設置:
    把試劑盒中提供的CCCP10mM )*按照1 1000 的比例加入到細胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應呈綠色熒光;而正常的細胞經(jīng)JC-1 染色后應顯示紅色熒光。對于特定的細胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關文獻資料決定。
3、對于懸浮細胞:
1)取 1060 萬細胞,重懸于 0.5mL 細胞培養(yǎng)液中,細胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細胞培養(yǎng)箱中 37 孵育20 分鐘。
3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液()加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(),并放置于冰浴。
437孵育結束后,600g 4 離心3 4 分鐘,沉淀細胞。棄上清,注意盡量不要吸除細胞。
5)用JC-1 染色緩沖液()洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液()重懸細胞,600g 4 離心34 分鐘,沉淀細胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液()重懸細胞,600g 4 離心 34 分鐘,沉淀細胞,棄上清。
6)再用適量 JC-1 染色緩沖液()重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細胞儀分析。
Western轉(zhuǎn)移緩沖液(5×),尼龍膜500ml實驗方法注意事項
1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
2PIpropidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
3Annexin V-FITCPI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標記時,盡可能在暗處進行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細胞標記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細胞,盡量在4下操作,以免影響細胞狀態(tài)。
5)在細胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結果。
6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進行流式檢測。
7PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
CXCL12 Protein Canine 重組狗 CXCL12 / SDF-1 蛋白

人前列腺成纖維細胞*培養(yǎng)基 100mL

IFNA5 Others Rat 大鼠 IFNA5 / IFNaG 人細胞裂解液 (陽性對照)

Calu-6細胞,人退行性癌細胞 克雷伯肺炎桿菌 敘利亞倉鼠腎細胞;BHK-21

雜交瘤(B);C3110D2E11

NCI-H1299(人非小細胞肺癌細胞) 5×106cells/瓶×2 甲型流感 H1N1 (A/USSR/90/1977) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)
人支氣管上皮細胞總RNAHBEpiC tRNA

ELK1 Others Human ELK1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)

中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆);CHO-HCV-E1

QGY-7701細胞,肝癌細胞 人宮頸上皮細胞癌,Ski細胞 KM小鼠子瘤株;U27

小鼠結締組織L細胞株929克隆;L-929 [L929]

ULBP1 Others Human ULBP1 / N2DL1 人細胞裂解液 (陽性對照)
CD40 Others Rat 大鼠 CD40 / TNFRSF5 人細胞裂解液 (陽性對照)

人導管瘤細胞;UACC812

Wistar大鼠骨髓間質(zhì)干細胞 Wistar rat bone marrow mesenchymal stem cells

SH-SY5Y細胞,人神經(jīng)上皮瘤細胞 粘質(zhì)沙雷氏菌 人肝細胞RNAHH miRNA5 μg

SK-CO-1(人結直腸腺癌細胞) 5×106cells/瓶×2

HCT-8(人盲腸腺癌細胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0402NCI-H520(人肺鱗癌細胞)5×106cells/瓶×2 恒河猴腎細胞;MMK3
大鼠熱休克蛋白糖蛋白96(HSP gp96)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

人胎盤蛋白13(PP13)免疫試劑盒 Human placental protein 13,PP13 ELISA Kit

單胺氧化酶測試盒 可見分光光度法 50/48

RatToll-likereceptor4,TLR4ELISA試劑盒大鼠Toll樣受體4(TLR4)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

HumanleukotrieneD4,LT-D4ELISA試劑盒人白三烯D4(LTD4)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

HumanOncostatin-MOSMELISAKit人抑瘤素M(OSM)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
兔抗內(nèi)皮細胞抗體(AECA)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Rat islet cell antibody (ICA) ELISA Kit 大鼠胰島細胞抗體(ICA)ELISA試劑盒

HumanBullousPemphigoid,BPELISAKit 人大皰性類天皰瘡抗體(BP)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humanglucoprotein130,gp130ELISA試劑盒人糖蛋白130(gp130)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

組織沉默調(diào)節(jié)蛋白1(SIRT1)活性熒光定量檢測試劑盒20

humanMusmusculussimilarto60SribosomalproteinL12,LOC382344ELISAKit人類似60S核糖體蛋白L21(LOC382344)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Western轉(zhuǎn)移緩沖液(5×),尼龍膜500ml實驗方法雞新城疫抗體(NDV-abELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

雞新城疫病毒(NDVELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

雞維生素DVDELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

雞透明質(zhì)酸(HA)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

 

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