骨組織蛋白提取試劑盒（2D電泳用）100T實(shí)驗(yàn)方法使用注意事項(xiàng)
1．微量試劑取用前請(qǐng)離心集液。
2．7-AAD避光保存及使用。
3．7-AAD為潛在致癌物，操作時(shí)請(qǐng)采取防護(hù)措施，穿*、戴手套等。
4．本試劑盒適用于檢測(cè)活細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)，細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105，，不*用于檢測(cè)組織樣本。
骨組織蛋白提取試劑盒（2D電泳用）100T實(shí)驗(yàn)方法操作方法
1．懸浮細(xì)胞離心（2000rpm離心5min）收集；貼壁細(xì)胞用*消化收集用PBS洗滌細(xì)胞二次（2000rpm離心5min）收集1~5×105細(xì)胞；
2．加入5μL 7-AAD染液，混勻；室溫、避光、反應(yīng)5～15min；
3．加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細(xì)胞；
4．請(qǐng)?jiān)?/span>1 hour內(nèi)，進(jìn)行下述熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀的觀(guān)察和檢測(cè)。
A．熒光顯微鏡觀(guān)察
1．滴一滴上述染色后的細(xì)胞懸液于載玻片上，并用蓋玻片蓋上細(xì)胞；
2．對(duì)于貼壁細(xì)胞來(lái)說(shuō)，也可直接用蓋玻片來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；
（1）將細(xì)胞于蓋玻片上生長(zhǎng)，用適當(dāng)?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，并設(shè)立陰性對(duì)照組；
（2）用PBS洗滌細(xì)胞兩次；
（3）在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液，混勻；
（4）將上述溶液滴加于蓋玻片表面，使長(zhǎng)有細(xì)胞的蓋玻片表面均勻覆蓋；
（5）避光、室溫反應(yīng)5 min。
3．將蓋玻片倒置于載玻片上，于熒光顯微鏡下觀(guān)察激發(fā)波長(zhǎng)546nm，發(fā)射波長(zhǎng)647 nm，7-AAD熒光信號(hào)呈紅色。
B．流式細(xì)胞儀分析
用流式細(xì)胞儀檢測(cè)，激發(fā)波長(zhǎng)Ex=546 nm; 發(fā)射波長(zhǎng)Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測(cè)。
骨組織蛋白提取試劑盒（2D電泳用）100T實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)步驟
貼壁細(xì)胞需用0.25%的*消化。注意過(guò)度消化可損傷細(xì)胞。在消化時(shí)可加2％的BSA可防止消化過(guò)度。如果用含EDTA的*消化時(shí)，注意必須*清除EDTA：在標(biāo)記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌，清除EDTA，以免殘余的EDTA與Ca2＋螯合，影響Annexin V的結(jié)合。
（1）用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer；
（2）細(xì)胞收集。懸浮細(xì)胞收集：離心5分鐘；貼壁細(xì)胞：用不含EDTA的*消化收集后（注：*消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，否則會(huì)影響細(xì)胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合），于室溫2000rpm離心5～10分鐘，收集細(xì)胞；
（3）細(xì)胞洗滌：用預(yù)冷1×PBS（4℃）重懸細(xì)胞一次，2000rpm離心5～10分鐘，洗滌細(xì)胞；
（4）加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細(xì)胞；
（5）Annexin V-FITC標(biāo)記：加入5μL的Annexin V-FITC混勻后，避光，室溫孵育15分鐘；
（6）PI標(biāo)記：上機(jī)前5分鐘再加入5μL的PI染色。
（7）上機(jī)前，補(bǔ)加200μL的1×Binding Buffer。
BTC Protein Human 重組人 BTC / Betacellulin 蛋白

大鼠肺大靜脈平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL

LYVE1 Others Mouse 小鼠 LYVE1 / LYVE-1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

FRhK-4細(xì)胞，恒河猴胚腎細(xì)胞 EB-3 [EB3](人淋巴樣Burkitt淋巴瘤細(xì)胞) CM-H026人淋巴內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

支氣管上皮細(xì)胞培養(yǎng)基BEpiCM-prf

MKN45(人胃癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 皮下脂肪細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml)
CL-0100HEC-1-B(人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

CSF2RB Others Rat 大鼠 CD131 / CSF2RB / IL3RB / IL5RB 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

人海馬趾星形膠質(zhì)細(xì)胞裂解物HA-h L

OVCaR-3細(xì)胞，人卵巢癌細(xì)胞 菜青蟲(chóng)卵巢細(xì)胞,Pr-HNV8細(xì)胞 神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml)

CEM/C1(人急性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

HUtSMC Pellet 人子宮平滑肌細(xì)胞團(tuán)塊 > 1 mio.cells 人表皮角質(zhì)細(xì)胞-cDNAHEK-acDNA
VEGFA Others Human 人 VEGF121b / VEGF-A 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

人心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞RNAHCMEC miRNA5 μg

大額牛皮膚成纖維樣細(xì)胞;BOS-1

PA319細(xì)胞，人大腸癌細(xì)胞 人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞,D407細(xì)胞 人前列腺癌細(xì)胞;PC-3 [PC3]

Hep G2(人肝癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

ACY1 Others Mouse 小鼠 ACY1 / Aminoacylase-1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
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