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包涵體溶解液50ml實(shí)驗(yàn)方法

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更新時(shí)間:2017-07-10 12:19:18瀏覽次數(shù):201次

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包涵體溶解液50ml實(shí)驗(yàn)方法公司供應(yīng)的細(xì)胞生物學(xué)試劑品種齊全,質(zhì)量保證,*,歡迎廣大科研用戶選購(gòu)!

包涵體溶解液50ml實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類(lèi)推;對(duì)于細(xì)胞懸液每50100 萬(wàn)細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 200×),按照每50μL JC-1200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽(yáng)性對(duì)照的設(shè)置:
    把試劑盒中提供的CCCP10mM )*按照1 1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線粒體膜電位的檢測(cè)。對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會(huì)*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對(duì)于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時(shí)間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對(duì)于懸浮細(xì)胞:
1)取 1060 萬(wàn)細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 孵育20 分鐘。
3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液()加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(),并放置于冰浴。
437孵育結(jié)束后,600g 4 離心3 4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
5)用JC-1 染色緩沖液()洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液()重懸細(xì)胞,600g 4 離心34 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液()重懸細(xì)胞,600g 4 離心 34 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
6)再用適量 JC-1 染色緩沖液()重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計(jì)檢測(cè)或流式細(xì)胞儀分析。
包涵體溶解液50ml實(shí)驗(yàn)方法注意事項(xiàng)
1)本試劑只適用于實(shí)驗(yàn),不適用于臨床檢測(cè);
2PIpropidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過(guò)皮膚吸收,對(duì)眼睛有刺激作用,使用時(shí)需戴手套;
3Annexin V-FITCPI是光敏物質(zhì),在操作時(shí)請(qǐng)注意避光。在處理和標(biāo)記時(shí),盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
4)整個(gè)操作過(guò)程動(dòng)作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請(qǐng)盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
6)為防止熒光衰變,宜在1小時(shí)內(nèi)進(jìn)行流式檢測(cè)。
7PI染色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)有可能造成檢測(cè)的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子

大鼠腸靜脈內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL

IL2RG Others Rat 大鼠 IL2RG / CD132 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

SUP-B15Ph+急淋白血病細(xì)胞系 SUP-B15 acute lymphoblastic leukemia cell line Ph+ IMDM培養(yǎng)基(GIBCO)+20%FBS

人心臟成纖維細(xì)胞HCF

293FT(人胚腎細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 支氣管成纖維細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
多聚賴(lài)氨酸10 mg/mlPLL

CRELD2 Others Mouse 小鼠 CRELD2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

白介素-2轉(zhuǎn)染耐VP16絨癌細(xì)胞;JEG-3/VP16-IL-2

雜交瘤(B類(lèi));Z172A4C4C6F3G12 Burkitt's 淋巴瘤細(xì)胞,Raji細(xì)胞 HBZY-1細(xì)胞,大鼠腎小球系膜細(xì)胞EC(HBZY-1)

UM-UC-3, 人膀胱移行細(xì)胞癌 Human

LILRB3 Others Human LILRB3 / LIR3 / ILT5 / CD85a 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
TNFRSF4 Others Mouse 小鼠 TNFRSF4 / OX40 / CD134 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

人羊膜細(xì)胞;WISH

HeLa 229 人細(xì)胞

EA.hy926人臍靜脈細(xì)胞融合細(xì)胞 EA.hy926 human umbilical vein cell fusion cells DMEM培養(yǎng)基+10%FBS

TNFSF9 Protein Mouse 重組小鼠 4-1BBL / CD137L / TNFSF9 蛋白 (His 標(biāo)簽)

大鼠條紋神經(jīng)元(RNs)(1×106) C6, 大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞 Rattus
大鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

人神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子3(NT-3)免疫試劑盒 Human Neurotrophin-3,NT-3 ELISA KIT

Mousegrowthhormonereleasingpeptide-Ghrelin,GHRP-GhrelinELISAKit小鼠生長(zhǎng)激素釋放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

通用型南芥菜花葉病毒(ArabisMosaicVirus;ArMV)基因檢測(cè)試劑盒20

Humanmelanocyteantibody,MCAbELISA試劑盒人黑色素細(xì)胞抗體(MCAb)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

Humanplacentalprotein,PPELISAKit人胎盤(pán)蛋白(PP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
人載脂蛋白E(Apo-E)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Human TNF related activation induced cytokine (TRANCE) ELISA Kit 人壞死因子相關(guān)激活誘導(dǎo)因子(TRANCE)ELISA試劑盒

Humaninterferon-inducibleprotein16,IFI16/p16ELISAKit 人γ干擾素誘導(dǎo)蛋白16/p16(IFI16/p16)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumanInhibin,INHELISA試劑盒人抑制素(INH)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

組織基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-7)活性熒光定量檢測(cè)試劑盒20

HumanLeptinReceptor,LEPRELISAKit人瘦素受體(LEPR)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
包涵體溶解液50ml實(shí)驗(yàn)方法大鼠二胺氧化酶(DAOELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

大鼠兒茶酚胺(CA)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

大鼠多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(DAT)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

大鼠多巴胺D2受體(D2R)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

我司包涵體溶解液50ml實(shí)驗(yàn)方法本著標(biāo)準(zhǔn)*、質(zhì)量*、服務(wù)*、信譽(yù)*的宗旨,為客戶提供輕松便捷,安全可靠的網(wǎng)上采購(gòu)模式!我們將竭誠(chéng)為您服務(wù),咨詢!

 

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