當前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>RNA/DNA提取>>探針標記及檢測產(chǎn)品>> 熒光尺1個規(guī)格
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更新時間:2017-07-17 12:43:33瀏覽次數(shù):127次
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熒光尺1個規(guī)格詳細說明書:
熒光尺1個規(guī)格使用方法:
一、交換反應 1. 實驗前需自備的試劑:7 M 醋酸銨、乙醇、70%乙醇等
2. 在微量離心管中制備下列反應液.
3. 37℃反應 30 分鐘。
4. 70℃加熱 5~10 分鐘使酶失活。
5. 加入 10 μL 的 7 M CH3COONH4(pH 4.5)。如使用 CH3COONa 做 乙醇沉淀時使其終濃度達 300 mM。
6. 加入 87.5 μL(2.5 倍)的冷無水乙醇,-20℃放置 30~60 分鐘。
7. 離心回收沉淀,用 70%的冷乙醇清洗沉淀,真空干燥。
8. 用適當 Buffer 溶解沉淀。 注:通過第 5~8 步操作幾乎可以除去大部分未反應的[γ-32P] ATP,如要 *將其除去時,乙醇沉淀后用凝膠過濾等方法精制即可。如需用*抽 提除去蛋白質(zhì)時,請在第 8 步之后進行。
熒光尺1個規(guī)格確定洗膜溫度:
一般使用 0.1×SSC 做洗膜液,在此條件下的洗膜溫度比 Tm 低 5-12℃,一般情況下可以在 55℃進行洗膜。Oligo 探針可以室溫洗膜。 四、預雜交步驟 預雜交就是用不含探針的超級雜交液跟印跡膜進行孵育,其目的是用所含 的非特異性 DNA 分子(鮭精 DNA 或小牛胸腺 DNA)及其它高分子化合物將印 跡膜上會非特異地吸附探針分子的位點封閉,否則這些位點會吸附標記的探 針,造成高背景。
1. 將結(jié)合了靶分子的硝酸纖維素印跡膜或尼龍印跡膜浸泡于自備的 6× SSC 溶液中,使其充分濕潤。
2. 將濕潤的印跡膜置于一塑料雜交袋中(塑料袋預先封口,再剪掉一角, 留一個小口),按每平方厘米印跡膜加 0.2 mL 超級雜交液的比例沿小口 加入超級雜交液,然后用塑料封口機將口封牢。 3. 將此塑料袋浸沒入溫度設定在雜交溫度的恒溫水浴中或雜交爐中,保 溫 1-2 小時,延長到 12-16 小時亦可。注意保溫過程中塑料袋應在不停 的搖動狀態(tài)中,使超級雜交液與印跡膜充分接觸。
熒光尺1個規(guī)格步驟:
1. 如果標記的探針是雙鏈核酸,則需經(jīng)變性處理。具體操作是:根據(jù)探針濃 度和雜交所需探針的量計算出所需的探針體積,取出所需體積的探針到一 干凈的硅化的塑料離心管中,加入等體積的本產(chǎn)品,吹打混勻后室溫放置 5 分鐘變性后,將探針樣品放入冰浴中冷卻,加入 0.05 倍體積的自備的 1 M 的 Tris-Cl 溶液(pH 7.2)以及等體積的自備的 0.4 M 的 HCl 溶液。 將探針樣品保存在冰浴中直至需要。如果是單鏈 DNA 或 RNA 探針,則 不需變性,直接使用。
2. 將單鏈探針或變性后的雙鏈探針加入到完成了預雜交的雜交袋中(先用剪 刀剪一小口,加入探針后用熱封機封口)。探針的加入量視探針標記效率 而定,一般要求終濃度不能低于 1-2 ng/mL。如果檢測基因組中的單拷 貝基因,探針的加入量應加大,而對于檢測克隆的基因片段,則探針的量 可減少。如果是放射性探針,應將此塑料袋套在另一塑料袋之中,以避免 雜交袋發(fā)生遺漏、污染工作環(huán)境。
3. 在選定的雜交溫度下繼續(xù)保溫,時間一般為 6-12 小時。 六、洗膜步驟。注意在下面的所有操作過程中,一定不要使印跡。
大鼠抑瘤素M(OSM)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人性激素結(jié)合球蛋白(SHBG)免疫試劑盒 Human sex hormone-binding globulin,SHBG ELISA Kit
檸檬酸合酶(CS)測試盒 可見分光光度法 50管/48樣
Ratlymphotactin,Lptn/LTNELISA試劑盒大鼠淋巴細胞趨化因子(Lptn/LTN/XCL1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanGuanineExchangeFactor,GEFELISA試劑盒人鳥苷酸交換因子(GEF)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanleucocyteantigenB27,HLA-B27ELISAKit人類白細胞抗原B27(HLA-B27)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
大鼠組織因子途徑抑制物(TFPI)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人血清淀粉樣蛋白P(SAP)免疫試劑盒 Human SAP ELISA Kit
人抗肌動蛋白抗體(AAA)ELISA試劑盒 ,英文名: AAA ELISA Kit
RatintactParathormone,i-PTHELISA試劑盒大鼠全段甲狀旁腺素(i-PTH)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Humangastricinhibitorypolypeptide,GIPELISA試劑盒人胃抑素(GIP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanInterleukin1,IL-1ELISAKit人白介素1(IL-1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
小鼠骨鈣素/骨谷酸蛋白(OT/BGP)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Rat terminal complement complex C5b-9 (TCC C5b-9) ELISA Kit 大鼠末端補體復合物C5b-9(TCC C5b-9)ELISA試劑盒
Humanthymusexpressedchemokine,TECKELISAKit 人胸腺表達趨化因子(TECK/CCL25)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
Humananti-ribosomalPproteinantibody,ARPA/Rib-PELISA試劑盒人抗核糖體P蛋白抗體(ARPA/Rib-P)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
植物細胞周期G0期同步(SYNCHRONY)處理試劑盒10次
HumantumormarkerDR-70forlungcancer,DR-70TMELISAKit人肺癌標志物DR-70(DR-70TM)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
15(S)-HEDE (250 ug) 15S-xy7noxy-11Z,13E-eicosadienoic acid; 15(S)-HEDE
α-(difluorometxyl)-DL-Arginine (25 mg) DFMA|RMI 71897; 2-(difluorometxyl)arginine
Nuclear Red LCS1 Nuclear Red LCS1
Tricosanoyl Ethanolamide (50 mg) N-(2-xy7noxyetxyl)-tricos*; Tricosanoyl Ethanolamide
5(Z),8(Z),11(Z)-Eicosatrienoic Acid Ethanolamide (5 mg) N-(2-xy7noxyetxyl)-5Z,8Z,11Z-eicosatrienamide; Mead Acid Ethanolamide; 5(Z),8(Z),11(Z)-Eicosatrienoic Acid Ethanolamide
1- Dantrolene wo7ium
gp100 (639-647)Arg-Leu-Pro-Arg-Ile-Phe-Cys-Ser-Cys
α-Defensin-1, humanAsp-His-Tyr-Asn-Cys-Val-Ser-Ser-Gly-Gly-Gln-Cys-Leu-Tyr-Ser-Ala-Cys-Pro-Ile-Phe-Thr-Lys-Ile-Gln-Gly-Thr-Cys-Tyr-Arg-Gly-Lys-Ala-Lys-Cys-Cys-Lys (Disulfide bridge: Cys5- Cys34, Cys12-Cys27, Cys17-Cys35)
[Nle11] Substance PArg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Phe-Gly-Leu-Nle-NH2
Biotin-Neurokinin ABiotin -His-Lys-Thr-Asp-Ser-Phe-Val-Gly-Leu-Met-NH2
p60c-src Substrate ITyr-Ile-Tyr-Gly-Ser-Phe-Lys
熒光尺1個規(guī)格過氧化十二酰Dilauroyl peroxide98%
CU11611-100mgUDPG/*核苷-5''-二磷酸葡萄糖28053-08-9100mg0
A1653-25MGAlbumin Human Serum (Fraction V) 人血清蛋白70024-90-725mg
Yeast Plasmid Kit100T
*1g
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