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dITP 溶液,100mM0.5mL保存

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更新時(shí)間:2017-07-17 13:12:04瀏覽次數(shù):116次

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dITP 溶液,100mM0.5mL保存是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對(duì)功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機(jī)率引入隨機(jī)引入突變。

dITP 溶液,100mM0.5mL保存使用方法:
1. 30 uL 的標(biāo)準(zhǔn) PCR 反應(yīng)體系為例,如果反應(yīng)體系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或減少。在一干凈的 PCR 管中,加入下列成分:易錯(cuò) PCR Mix, 10× 3 uL 易錯(cuò) PCR dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自備 DNA 模板(10ng/uL 1 uL PCR 引物(自備,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL 1 -5 U 補(bǔ)水到 30 uL
2.
按已經(jīng)優(yōu)化的 PCR 條件進(jìn)行一定循環(huán)數(shù)的 PCR(循環(huán)數(shù)與突變率的關(guān)系見下表),然后取 5 uL 電泳檢查。如果沒(méi)有優(yōu)化的 PCR 條件,一般可以先嘗試下面的 PCR 條件: PCR 前變性 94 3 分鐘易錯(cuò) PCR 94 1 分鐘 45 1 分鐘 循環(huán) 30 次(見注) 72 1 分鐘注:易錯(cuò) PCR 一般不需要熱啟動(dòng),也不需要在 PCR 結(jié)束后做延伸處理。
dITP 溶液,100mM0.5mL保存產(chǎn)品及特點(diǎn):
易錯(cuò) PCRerror-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對(duì)功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機(jī)率引入隨機(jī)引入突變。如果有適當(dāng)?shù)倪x擇方法,則可從構(gòu)建的突變庫(kù)選出所需突變體。易錯(cuò) PCR 和常規(guī) PCR 的比較如下:本產(chǎn)品就是專門為廣大的研究工作者進(jìn)行易錯(cuò) PCR 而開發(fā),本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):
1. 即開即用,十分簡(jiǎn)單方便,尤其在生物制藥和酶學(xué)研究領(lǐng)域顯示出了它的*性。
2. 配方經(jīng)過(guò)精心優(yōu)化,突變率穩(wěn)定,突變沒(méi)有趨向性。易錯(cuò) PCR 的突變率為 0.66% ±0.13%),詳見使用手冊(cè)疑難解答。
3. 比體內(nèi)基因突變更快捷簡(jiǎn)單,但如果在 PCR 引物中設(shè)計(jì)位點(diǎn),則可使產(chǎn)物克隆到表達(dá)載體,也可以用于體內(nèi)蛋白活性的篩選。
4. 可用于連續(xù)易錯(cuò) PCRsequential error-prone PCR),只需把上一次易錯(cuò) PCR 的產(chǎn)物用作下一次易錯(cuò) PCR 的模板即可,使每一次獲得的小突變累積而產(chǎn)生重要的有益突變。
5. 只適用于擴(kuò)增 1kb 以下的產(chǎn)物,對(duì)于 1kb 以上的產(chǎn)物,建議分段擴(kuò)增。
dITP 溶液,100mM0.5mL保存DNA 擴(kuò)增效率下降;
溫度低產(chǎn)量高,但過(guò)低可造成引物與模板 錯(cuò)配,非特異性產(chǎn)物增加。合適的退火溫度一般在 45~68之間。設(shè)置特定反應(yīng)的 適退火溫度,可根據(jù)引物的(G+C%含量進(jìn)行推測(cè),一般實(shí)驗(yàn)中退火溫度比擴(kuò)增引 物的熔解溫度 Tm 5,退火時(shí)間一般為 30~60 秒,足以使引物與模板之間*結(jié) 合,長(zhǎng)時(shí)間退火沒(méi)有必要。
dITP 溶液,100mM0.5mL保存詳細(xì)說(shuō)明書:

15S-15-methyl Prostaglandin E2 1 mg     9-oxo-11。alpha。,15S-dihydroxy-15-methyl-prosta-5Z13E-dien-1-oic acid; 15S-15-methyl PGE2 15S-15-methyl Prostaglandin E2

Caspofungin acetate 25 mg     L-743,872|MK 0991; 1-[4R,5S-5-[2-aminoethylamino]-N2-[10R,12S-10,12-dimethyl-1-oxotetradecyl]-4-hydroxy-L-ornithine]-5-[3R-3-hydroxy-lornithine]-pneumocandin B0 acetate 1:2

*(5GM     Rifampicin, 13292-46-1 MW 822.94; 97%

nitnacaine 10 mg     3-diethylamino-22-dimethylpropyl 4-nitnobenzoate; nitnacaine

FK-409 50 mg     4-ethyl-2E-hydroxyimino-5-nitno-3E-hexenamide NOR-3; FK-409

N-4-Trifluoromethylphenyl-2-cyano-3-hydroxycrotonamide 2-Cyano-3-hydroxy-N-[4-trifluoromethylphenyl]-2-butenamide     A77 1726
PtdIns-4-P1 1,2-dipalmitoyl ammonium salt 100 ug     1-12-dihexadecanoylphosphatidylinositol-4-phosphate, diammonium salt; DPPI-4-P1 PtdIns-4-P1 1,2-dipalmitoyl ammonium salt

Ac-Calpastatin 184-210 100 ug     Calpastatin Peptide B27-WT

Cardiogenol C hydrochloride 10 mg     2-[[2-[4-methoxyphenylamino]-4-pyrimidinyl]amino]-ethanol Cardiogenol C hydrochloride

25C-NBOH hydrochloride 5 mg     2;C-C-NBOH 2-[[[2-4-chloro-2,5-dimethoxyphenylethyl]amino]methyl]-phenol, monohydrochloride

Ruthenium Red 100 mg     emmonieted Ruthenium Oxychloride|C。I。 7780Ruthenium Red

DiaEasy Dialyzer (15 ml) MWCO 1 kDa     DiaEasy Dialyzer (15 ml) MWCO 1 kDa
13S-HODE-biotin 100 ug     13S-xy7noxy-9Z11E-octadecadiene-2-biotinylhydrazide; 13S-HODE-biotin

RHC-80267 10 mg     U-57908; 1,1-[O,O-[1,6-hexanediylbisiminocarbonyl]dioxime]

鬼筆環(huán)肽-iFluor 350偶聯(lián)物     Phalloidin-iFluor 350 Conjugate

Butylone-d3 xy7nochloride 500 ug     1-1,3-benzodioxol-5-yl-2-metxyl-d3-amino-1-butenone, monoxy7nochloride; β-keto MBDB-d3; Butylone-d3 xy7nochloride

Oleic Acid 10 g     9Z-Octadecenoic acid Oleic Acid

4a-     Pseudolaric Acid B
改良frey氏培養(yǎng)基250g用于培養(yǎng)滑液支原體及其他禽支原體用。

三糖鐵瓊脂 根據(jù)葡萄糖、乳糖和蔗糖的發(fā)酵及硫化氫的產(chǎn)生、鑒定革蘭氏陰性菌 500g incubation media 三糖鐵瓊脂 根據(jù)葡萄糖、乳糖和蔗糖的發(fā)酵及硫化氫的產(chǎn)生、鑒定革蘭氏陰性菌 500g

白球擬酵母 /

LB肉湯300ml/*基因工程菌大腸桿菌培養(yǎng)

HCAgar,Modified
曙紅亞甲基藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基(EMB)250g弱選擇性培養(yǎng)基、用于分離腸道致病菌,特別是大腸桿菌

T1N3肉湯 250(g) incubation media T1N3肉湯 250(g)

*檢定培養(yǎng)基 Nystatin Medium 250 *效價(jià)測(cè)定用

酸性L-G培養(yǎng)基基礎(chǔ)250適用于堿性物質(zhì)處理的結(jié)核桿菌標(biāo)本incubationmedia酸性L-G培養(yǎng)基基礎(chǔ)250適用于堿性物質(zhì)處理的結(jié)核桿菌標(biāo)本

多粘菌素B(1萬(wàn)單位) 1萬(wàn)單位*5 添加于100mlHB0249HB0280HB0248-
dITP 溶液,100mM0.5mL保存ISPMedium

BactoTM Agar incubation media BactoTM Agar

頂頭孢霉 產(chǎn)延胡索酸 /

BismuthSulfiteAgar

WortAgar

dITP 溶液,100mM0.5mL保存變性溫度與時(shí)間:
模板變性溫度是決定 PCR 反應(yīng)中雙鏈 DNA 解鏈的溫度,達(dá)不到變 性溫度就不會(huì)產(chǎn)生單鏈 DNA 模板,PCR 也就不會(huì)啟動(dòng)。變性溫度低則變性不*, DNA 雙鏈會(huì)很快復(fù)性,因而減少產(chǎn)量。變性溫度太高,又會(huì)影響酶的活性。一般情況 下可設(shè)為 94 20~30 秒,高溫時(shí)間應(yīng)盡量縮短,以保持耐熱 DNA 聚合酶的活力, 高變性溫度不宜超過(guò) 95。 退火溫度與時(shí)間:退火溫度決定 PCR 特異性與產(chǎn)量。溫度高特異性強(qiáng),但過(guò)高則引物 不能與模板牢固結(jié)合

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