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探針標(biāo)記 PCR Mix 0.5mL保存

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探針標(biāo)記 PCR Mix 0.5mL保存是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對(duì)功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機(jī)率引入隨機(jī)引入突變。

探針標(biāo)記 PCR Mix 0.5mL保存產(chǎn)品及特點(diǎn):
易錯(cuò) PCRerror-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對(duì)功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機(jī)率引入隨機(jī)引入突變。如果有適當(dāng)?shù)倪x擇方法,則可從構(gòu)建的突變庫選出所需突變體。易錯(cuò) PCR 和常規(guī) PCR 的比較如下:本產(chǎn)品就是專門為廣大的研究工作者進(jìn)行易錯(cuò) PCR 而開發(fā),本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):
1. 即開即用,十分簡(jiǎn)單方便,尤其在生物制藥和酶學(xué)研究領(lǐng)域顯示出了它的*性。
2. 配方經(jīng)過精心優(yōu)化,突變率穩(wěn)定,突變沒有趨向性。易錯(cuò) PCR 的突變率為 0.66% ±0.13%),詳見使用手冊(cè)疑難解答。
3. 比體內(nèi)基因突變更快捷簡(jiǎn)單,但如果在 PCR 引物中設(shè)計(jì)位點(diǎn),則可使產(chǎn)物克隆到表達(dá)載體,也可以用于體內(nèi)蛋白活性的篩選。
4. 可用于連續(xù)易錯(cuò) PCRsequential error-prone PCR),只需把上一次易錯(cuò) PCR 的產(chǎn)物用作下一次易錯(cuò) PCR 的模板即可,使每一次獲得的小突變累積而產(chǎn)生重要的有益突變。
5. 只適用于擴(kuò)增 1kb 以下的產(chǎn)物,對(duì)于 1kb 以上的產(chǎn)物,建議分段擴(kuò)增。
探針標(biāo)記 PCR Mix 0.5mL保存變性溫度與時(shí)間:
模板變性溫度是決定 PCR 反應(yīng)中雙鏈 DNA 解鏈的溫度,達(dá)不到變 性溫度就不會(huì)產(chǎn)生單鏈 DNA 模板,PCR 也就不會(huì)啟動(dòng)。變性溫度低則變性不*, DNA 雙鏈會(huì)很快復(fù)性,因而減少產(chǎn)量。變性溫度太高,又會(huì)影響酶的活性。一般情況 下可設(shè)為 94 20~30 秒,高溫時(shí)間應(yīng)盡量縮短,以保持耐熱 DNA 聚合酶的活力, 高變性溫度不宜超過 95。 退火溫度與時(shí)間:退火溫度決定 PCR 特異性與產(chǎn)量。溫度高特異性強(qiáng),但過高則引物 不能與模板牢固結(jié)合.
探針標(biāo)記 PCR Mix 0.5mL保存DNA 擴(kuò)增效率下降;
溫度低產(chǎn)量高,但過低可造成引物與模板 錯(cuò)配,非特異性產(chǎn)物增加。合適的退火溫度一般在 45~68之間。設(shè)置特定反應(yīng)的 適退火溫度,可根據(jù)引物的(G+C%含量進(jìn)行推測(cè),一般實(shí)驗(yàn)中退火溫度比擴(kuò)增引 物的熔解溫度 Tm 5,退火時(shí)間一般為 30~60 秒,足以使引物與模板之間*結(jié) 合,長(zhǎng)時(shí)間退火沒有必要。
探針標(biāo)記 PCR Mix 0.5mL保存詳細(xì)說明書:

探針標(biāo)記 PCR Mix 0.5mL保存使用方法:
1. 30 uL 的標(biāo)準(zhǔn) PCR 反應(yīng)體系為例,如果反應(yīng)體系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或減少。在一干凈的 PCR 管中,加入下列成分:易錯(cuò) PCR Mix, 10× 3 uL 易錯(cuò) PCR dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自備 DNA 模板(10ng/uL 1 uL PCR 引物(自備,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL 1 -5 U 補(bǔ)水到 30 uL
2.
按已經(jīng)優(yōu)化的 PCR 條件進(jìn)行一定循環(huán)數(shù)的 PCR(循環(huán)數(shù)與突變率的關(guān)系見下表),然后取 5 uL 電泳檢查。如果沒有優(yōu)化的 PCR 條件,一般可以先嘗試下面的 PCR 條件: PCR 前變性 94 3 分鐘易錯(cuò) PCR 94 1 分鐘 45 1 分鐘 循環(huán) 30 次(見注) 72 1 分鐘注:易錯(cuò) PCR 一般不需要熱啟動(dòng),也不需要在 PCR 結(jié)束后做延伸處理。
17-phenyl trinor Prostaglandin E2 10 mg     9-oxo-11。alpha。,15S-dihydroxy-17-phenyl-18,1920-trinor-prosta-5Z,13E-dien-1-oic acid 17-phenyl trinor PGE2; 17-phenyl trinor Prostaglandin E2

10058-F4 5 mg     5-[4-ethylphenylmethylene]-2-thioxo-4-thiazolidinone

*七水合物(500GM     Sodium Phosphate, Dibasic, Heptahydrate, ACS Grade; Cas 7782-85-6; Formula: Na2HPO4

Arctigenin 100 mg     3R,4R-4-[3,4-dimethoxyphenylmethyl]dihydro-3-[4-hydroxy-3-methoxyphenylmethyl]-23H-furanone; Arctigenin

2,7-Dichlorodihydrofluorescein diacetate 500 mg     2-2,7-dichloro-3,6-diacetyloxy-9H-xanthen-9-yl-benzoic acid; DCFH|DCFH-DA; 27-Dichlorodihydrofluorescein diacetate

4-Nonylphenyl-polyethylene glycol, Imbentin-N/52, NP 40     NP-40 Substitute, MegaPure Detergent, 10% Solution
Fluorometric Developer Reagent 60 ug     Fluorometric Developer Reagent

AZD 2461     4-[[4-fluoro-3-[4-methoxy-1-piperidinylcarbonyl]phenyl]methyl]-12H-Phthalazinone

Daidzin 10 mg     7-(β-D-glucopyranosyloxy-3-4-hydroxyphenyl-4H-1-benzopyran-4-one Daidzoside| NPI 031D; Daidzin

25N-NBOMe hydrochloride 5 mg     2C-N-NBOMe; 2-2,5-dimethoxy-4-nitnophenyl-N-2-methoxybenzylethanamine, monohydrochloride

AM694 N-5-hydroxypentyl metabolite 10 mg     [1-5-hydroxypentyl-1H-indol-3-yl]2-iodophenyl-methanone; AM694 N-5-hydroxypentyl metabolite

DiaEasy Dialyzer (800 ul) MWCO 1 kDa     DiaEasy Dialyzer (800 ul) MWCO 1 kDa
20-HETE-d6 100 ug     20-xy7noxy-5Z,8Z,11Z,14Z-eicosatetraenoic-16,16,171718,18-d6 acid 20-xy7noxy Arachidonic Acid-d6; 20-HETE-d6

pxenyleetone exempt preparation 1 mg     Benzyl metxyl Ketone|P2P|pxenyl-4-pnopenone 1-pxenyl-4-pnopenone

AMCA      AMCA Alkyne

2-etxylami-pxenylbutane xy7nochloride 5 mg     N,α-dietxyl-benzeneethanamine, monoxy7nochloride; 2-etxylami-pxenylbutane xy7nochloride

MEDICA 16 1 mg     3,314,14-tetrametxylhexadecanedioic acid; MEDICA 16

1,34,68,13-Hexaxy7noxy-10,11-dimetxylpxenanthro[1,10,9,8-opqra]perylene-714-dione     Hypericin
BifidobacteriumBSMedium

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