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DNA Shuffling 試劑盒10 次圖片

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更新時(shí)間:2017-07-17 13:28:06瀏覽次數(shù):166次

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DNA Shuffling 試劑盒10 次圖片是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對(duì)功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機(jī)率引入隨機(jī)引入突變。

DNA Shuffling 試劑盒10 次圖片產(chǎn)品及特點(diǎn):
易錯(cuò) PCRerror-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對(duì)功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機(jī)率引入隨機(jī)引入突變。如果有適當(dāng)?shù)倪x擇方法,則可從構(gòu)建的突變庫(kù)選出所需突變體。易錯(cuò) PCR 和常規(guī) PCR 的比較如下:本產(chǎn)品就是專(zhuān)門(mén)為廣大的研究工作者進(jìn)行易錯(cuò) PCR 而開(kāi)發(fā),本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):
1. 即開(kāi)即用,十分簡(jiǎn)單方便,尤其在生物制藥和酶學(xué)研究領(lǐng)域顯示出了它的*性。
2. 配方經(jīng)過(guò)精心優(yōu)化,突變率穩(wěn)定,突變沒(méi)有趨向性。易錯(cuò) PCR 的突變率為 0.66% ±0.13%),詳見(jiàn)使用手冊(cè)疑難解答。
3. 比體內(nèi)基因突變更快捷簡(jiǎn)單,但如果在 PCR 引物中設(shè)計(jì)位點(diǎn),則可使產(chǎn)物克隆到表達(dá)載體,也可以用于體內(nèi)蛋白活性的篩選。
4. 可用于連續(xù)易錯(cuò) PCRsequential error-prone PCR),只需把上一次易錯(cuò) PCR 的產(chǎn)物用作下一次易錯(cuò) PCR 的模板即可,使每一次獲得的小突變累積而產(chǎn)生重要的有益突變。
5. 只適用于擴(kuò)增 1kb 以下的產(chǎn)物,對(duì)于 1kb 以上的產(chǎn)物,建議分段擴(kuò)增。
DNA Shuffling 試劑盒10 次圖片變性溫度與時(shí)間:
模板變性溫度是決定 PCR 反應(yīng)中雙鏈 DNA 解鏈的溫度,達(dá)不到變 性溫度就不會(huì)產(chǎn)生單鏈 DNA 模板,PCR 也就不會(huì)啟動(dòng)。變性溫度低則變性不*, DNA 雙鏈會(huì)很快復(fù)性,因而減少產(chǎn)量。變性溫度太高,又會(huì)影響酶的活性。一般情況 下可設(shè)為 94 20~30 秒,高溫時(shí)間應(yīng)盡量縮短,以保持耐熱 DNA 聚合酶的活力, 高變性溫度不宜超過(guò) 95。 退火溫度與時(shí)間:退火溫度決定 PCR 特異性與產(chǎn)量。溫度高特異性強(qiáng),但過(guò)高則引物 不能與模板牢固結(jié)合.
DNA Shuffling 試劑盒10 次圖片DNA 擴(kuò)增效率下降;
溫度低產(chǎn)量高,但過(guò)低可造成引物與模板 錯(cuò)配,非特異性產(chǎn)物增加。合適的退火溫度一般在 45~68之間。設(shè)置特定反應(yīng)的 適退火溫度,可根據(jù)引物的(G+C%含量進(jìn)行推測(cè),一般實(shí)驗(yàn)中退火溫度比擴(kuò)增引 物的熔解溫度 Tm 5,退火時(shí)間一般為 30~60 秒,足以使引物與模板之間*結(jié) 合,長(zhǎng)時(shí)間退火沒(méi)有必要。
DNA Shuffling 試劑盒10 次圖片詳細(xì)說(shuō)明書(shū):

DNA Shuffling 試劑盒10 次圖片使用方法:
1. 30 uL 的標(biāo)準(zhǔn) PCR 反應(yīng)體系為例,如果反應(yīng)體系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或減少。在一干凈的 PCR 管中,加入下列成分:易錯(cuò) PCR Mix, 10× 3 uL 易錯(cuò) PCR dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自備 DNA 模板(10ng/uL 1 uL PCR 引物(自備,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL 1 -5 U 補(bǔ)水到 30 uL
2.
按已經(jīng)優(yōu)化的 PCR 條件進(jìn)行一定循環(huán)數(shù)的 PCR(循環(huán)數(shù)與突變率的關(guān)系見(jiàn)下表),然后取 5 uL 電泳檢查。如果沒(méi)有優(yōu)化的 PCR 條件,一般可以先嘗試下面的 PCR 條件: PCR 前變性 94 3 分鐘易錯(cuò) PCR 94 1 分鐘 45 1 分鐘 循環(huán) 30 次(見(jiàn)注) 72 1 分鐘注:易錯(cuò) PCR 一般不需要熱啟動(dòng),也不需要在 PCR 結(jié)束后做延伸處理。
19R-hydroxy Prostaglandin E2 100 ug     9-oxo-11α,15S,19R-trihydroxy-prosta-5Z13E-dien-1-oic acid; 19R-hydroxy PGE2|19R-OH PGE2 19R-hydroxy Prostaglandin E2

Taurodeoxycholic Acid sodium salt 1 g     STDC; 2-[[3α,5β,12α)-3,12-dihydroxy-24-oxocholan-24-yl]amino]-ethanesulfonic acid, monosodium salt

一水*(5KG     Sodium Phosphate Monobasic, Monohydrate USP Grade; 10049-21-5 Formula:NaH2PO4

Oxymatrine 1 g     4R,7aS,13aR,13bR13cS-dodecahydro-4-oxide-1H,5H10H-dipyrido[2,1-f:3’,2’,1-ij][16]naphthyridin-10-one; Matrine 1-oxide Oxymatrine

DAF-2 diacetate 250 ug     2-3,6-diacetyloxy-4,5-diamino-9H-xanthen-9-yl-benzoic acid; 45-Diaminofluorescein diacetate; DAF-2 diacetate

3-Ethyldimethylammoniopropane-1-sulfonate     NDSB-195
Developing Enzyme Assay Reagent 1 mg     Developing Enzyme Assay Reagent

*標(biāo)記二甲基化組蛋白H3K4多肽     Biotinylated Dimethyl Histone H3K4 Peptide 200 ul

Halopemide 25 mg     N-[2-[4-5-chloro-2,3-dihydro-2-oxo-1H-benzimidazol-1-yl-1-piperidinyl]-ethyl]-4-fluoro-benzamide NSC 354856|R34301; Halopemide

Cathepsin G Inhibitor I 1 mg     P-

JWH 081 N-4-hydroxypentyl metabolite-d5 500 ug     1-4-hydroxypentyl-1H-indol-3-yl-24,5,67-d5)(4-methoxynaphthalen-1-ylmethanone; JWH 081 N-4-hydroxypentyl metabolite-d5

DiaEasy Dialyzer (800 ul) MWCO 6-8 kDa     DiaEasy Dialyzer (800 ul) MWCO 6-8 kDa
Linoleic Acid-d4 10 mg     9Z,12Z-octadecadienoic-9,10,12,13-d4 acid; Linoleic Acid-d4

AB-CHMINACA metabolite M6 500 ug     4-amino-3-1-cyclohexylmetxyl-1H-indazole-3-carboxamido-2-metxyl-4-oxobutanoic acid

iFluor 647 酰進(jìn)     iFluor 647 hydrazide

CMPF-d5 10 mg     2-2-carboxyetxyl-4-metxyl-5-propyl-22’,3,33-d5furan-3-carboxylic acid CMPF-d5

Adrenic Acid 25 mg     7Z,10Z13Z,16Z-docosatetraenoic acid; Adrenic Acid

4’,7-Dixy7noxy-5-metxoxy-8-prenylflavanone; Humulol IXN     Isoxanthohumol
動(dòng)力-鹽培養(yǎng)基(A)250g用于產(chǎn)氣莢膜梭菌的動(dòng)力和鹽還原試驗(yàn)

十六烷*基*瓊脂 Cetrimide Agar 用于綠膿桿菌的選擇性分離培養(yǎng)(GB標(biāo)準(zhǔn))

M-TGE肉湯 M-TGE Broth 250 奶制品中濾膜細(xì)菌計(jì)數(shù)

醋酸鹽瓊脂用于細(xì)菌醋酸鹽試驗(yàn)incubationmedia醋酸鹽瓊脂用于細(xì)菌醋酸鹽試驗(yàn)

40%尿素水 5ml*10 加入尿素酶瓊脂基礎(chǔ)
minimumNutritionalV-BMedium

C.L.E.DMediumSupplement

V-J瓊脂 Vogel-Johnson Agar 250 病源標(biāo)本和其它標(biāo)本中*陽(yáng)性*的選擇性分離(Merck方法)

糖發(fā)酵培養(yǎng)基250g/瓶溴*藍(lán)為指示劑,不含碳源,用于糖發(fā)酵試驗(yàn)(GB、藥典)incubationmedia糖發(fā)酵培養(yǎng)基250g/瓶溴*藍(lán)為指示劑,不含碳源,用于糖發(fā)酵試驗(yàn)(GB、藥典)

WagstsumaBloodAgarBase
DNA Shuffling 試劑盒10 次圖片肉湯培養(yǎng)基I250g用于沙門(mén)氏菌選擇性增菌培養(yǎng)。

Antibiotic agar GROVE and RANDALL medium 抗生素瓊脂1號(hào) 1.05272.0500 MERCK默克 incubation media Antibiotic agar GROVE and RANDALL medium 抗生素瓊脂1號(hào) 1.05272.0500 MERCK默克

Fraser肉湯增菌液(FB1,FB2)基礎(chǔ) 250g 用于李斯特氏的選擇性增菌培養(yǎng)(SN/T0184.1-2

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