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無脊椎動(dòng)物種屬鑒定 PCR Mix100 次保存

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更新時(shí)間:2017-07-17 14:19:50瀏覽次數(shù):161次

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無脊椎動(dòng)物種屬鑒定 PCR Mix100 次保存是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對(duì)功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機(jī)率引入隨機(jī)引入突變。

無脊椎動(dòng)物種屬鑒定 PCR Mix100 次保存產(chǎn)品及特點(diǎn):
易錯(cuò) PCRerror-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對(duì)功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機(jī)率引入隨機(jī)引入突變。如果有適當(dāng)?shù)倪x擇方法,則可從構(gòu)建的突變庫(kù)選出所需突變體。易錯(cuò) PCR 和常規(guī) PCR 的比較如下:本產(chǎn)品就是專門為廣大的研究工作者進(jìn)行易錯(cuò) PCR 而開發(fā),本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):
1. 即開即用,十分簡(jiǎn)單方便,尤其在生物制藥和酶學(xué)研究領(lǐng)域顯示出了它的*性。
2. 配方經(jīng)過精心優(yōu)化,突變率穩(wěn)定,突變沒有趨向性。易錯(cuò) PCR 的突變率為 0.66% ±0.13%),詳見使用手冊(cè)疑難解答。
3. 比體內(nèi)基因突變更快捷簡(jiǎn)單,但如果在 PCR 引物中設(shè)計(jì)位點(diǎn),則可使產(chǎn)物克隆到表達(dá)載體,也可以用于體內(nèi)蛋白活性的篩選。
4. 可用于連續(xù)易錯(cuò) PCRsequential error-prone PCR),只需把上一次易錯(cuò) PCR 的產(chǎn)物用作下一次易錯(cuò) PCR 的模板即可,使每一次獲得的小突變累積而產(chǎn)生重要的有益突變。
5. 只適用于擴(kuò)增 1kb 以下的產(chǎn)物,對(duì)于 1kb 以上的產(chǎn)物,建議分段擴(kuò)增。
無脊椎動(dòng)物種屬鑒定 PCR Mix100 次保存變性溫度與時(shí)間:
模板變性溫度是決定 PCR 反應(yīng)中雙鏈 DNA 解鏈的溫度,達(dá)不到變 性溫度就不會(huì)產(chǎn)生單鏈 DNA 模板,PCR 也就不會(huì)啟動(dòng)。變性溫度低則變性不*, DNA 雙鏈會(huì)很快復(fù)性,因而減少產(chǎn)量。變性溫度太高,又會(huì)影響酶的活性。一般情況 下可設(shè)為 94 20~30 秒,高溫時(shí)間應(yīng)盡量縮短,以保持耐熱 DNA 聚合酶的活力, 高變性溫度不宜超過 95。 退火溫度與時(shí)間:退火溫度決定 PCR 特異性與產(chǎn)量。溫度高特異性強(qiáng),但過高則引物 不能與模板牢固結(jié)合.
無脊椎動(dòng)物種屬鑒定 PCR Mix100 次保存DNA 擴(kuò)增效率下降;
溫度低產(chǎn)量高,但過低可造成引物與模板 錯(cuò)配,非特異性產(chǎn)物增加。合適的退火溫度一般在 45~68之間。設(shè)置特定反應(yīng)的 適退火溫度,可根據(jù)引物的(G+C%含量進(jìn)行推測(cè),一般實(shí)驗(yàn)中退火溫度比擴(kuò)增引 物的熔解溫度 Tm 5,退火時(shí)間一般為 30~60 秒,足以使引物與模板之間*結(jié) 合,長(zhǎng)時(shí)間退火沒有必要。
無脊椎動(dòng)物種屬鑒定 PCR Mix100 次保存使用方法:
1. 30 uL 的標(biāo)準(zhǔn) PCR 反應(yīng)體系為例,如果反應(yīng)體系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或減少。在一干凈的 PCR 管中,加入下列成分:易錯(cuò) PCR Mix, 10× 3 uL 易錯(cuò) PCR dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自備 DNA 模板(10ng/uL 1 uL PCR 引物(自備,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL 1 -5 U 補(bǔ)水到 30 uL
2.
按已經(jīng)優(yōu)化的 PCR 條件進(jìn)行一定循環(huán)數(shù)的 PCR(循環(huán)數(shù)與突變率的關(guān)系見下表),然后取 5 uL 電泳檢查。如果沒有優(yōu)化的 PCR 條件,一般可以先嘗試下面的 PCR 條件: PCR 前變性 94 3 分鐘易錯(cuò) PCR 94 1 分鐘 45 1 分鐘 循環(huán) 30 次(見注) 72 1 分鐘注:易錯(cuò) PCR 一般不需要熱啟動(dòng),也不需要在 PCR 結(jié)束后做延伸處理。
13,14-dihydro Prostaglandin F1α 10 mg     9。alpha。,11alpha。,15S-trihydroxy-prostan-1-oic acid; PGFα|13,14-dihydro PGF1α; 13,14-dihydro Prostaglandin F1α

MMB018 10 mg     methyl 1-pentyl-1H-indole-3-carbonyl-L-valinate

三羥基氨甲烷鹽酸鹽(5KG     TRIS Hydrochloride 1185-53-1; MW 157.8

Tetrodotoxin Citrate 1 mg     4R,4aR5R,7S9S,10S10aR,11S,12S-2-ami,4,4a,5,9,10-hexahydro-12-hydroxymethyl-5,9:7,10a-dimethanol-10aH-[1,3]dioxocino[6,5-d]pyrimidine-4,7,1011,12-pentol, citrate; TTX Tetrodotoxin Citrate

Prostaglandin A1 methyl ester 10 mg     15S-hydroxy-9-oxo-prosta-10,13E-dien-1-oic acid methyl ester; PGA1 methyl ester Prostaglandin A1 methyl ester

5,74-Trihydroxyflavanone; 2,3-dihydro-5,7-dihydroxy-2-4-hydroxyphenyl-4H-1-benzopyran-4-one; NGEN     Naringenin
G6PDH Cofactor 1 ea     G6PDH Cofactor

*標(biāo)記組蛋白H3多肽(69-89     Biotinylated Histone H3 Peptide residues 69-89 100 ul

Thiamet G 5 mg     2-ethylamino-3aR,6S,7R7aR-tetrahydro-5R-hydroxymethyl-5H-pyrano[3,2-d]thiazole-6,7-diol Thiamet G

PLX4720 10 mg     Raf Kinase Inhibitor V; N-[3-[5-chloro-1H-pyrrolo[2,3-b]pyridin-3-ylcarbonyl]-2,4-difluorophenyl]-1-propanesulfonamide

β-Glycerophosphate sodium salt hydrate 50 g     2-dihydrogen phosphate-12,3-propanetriol disodium salt, pentahydrate β-Glycerophosphate sodium salt hydrate

15-keto Prostaglandin E2 Lipid Maps MS Standard (50 mg)     15-keto PGE2, 15-keto Prostaglandin E2 Lipid Maps MS Standard, 9,15-dioxo-11α-hydroxy-prosta-5Z,13E-dien-1-oic acid
Ellmans Reagent 100 dtn     Ellmans Reagent

1,2-O-Dihexadecyl-rac-glycerol 500 mg     2,3-bishexadecyloxy-1-propanol

yenine 3。5馬來酰亞胺 [相當(dāng)于Cy35馬來酰亞胺]     yenine 3。5 Maleimide [equivalent to Cy3。5 Maleimide]

Donepezil 100 mg     2,3-dixy7no-5,6-dimetxoxy-2[[1-pxenylmetxyl-4-piperidinyl]metxyl]-1H-inden-1-one; Aricept Donepezil

5S),6R-Lipoxin A4 100 ug     5S,6R,15S-trixy7noxy-7E9E,11Z,13E-eicosatetraenoic acid 5S),6R),15S-TriHETE|5S),6R-LXA4 5S),6R-Lipoxin A4

N6-metxyl-R-roscovitine; Amyloid-β Forty-Two Inducer 4     Aftin-4
維生素K加入HB0398

纖維二糖-多粘菌素E(CC)瓊脂 用于創(chuàng)傷弧菌分離培養(yǎng)基

Lambda Broth Lambda Broth 100 BR

酵母膏-麥芽膏瓊脂ISPMedium2(YeastExtractMaltExtractAgar)250g/瓶用于鏈霉菌屬的培養(yǎng)鑒定incubationmedia酵母膏-麥芽膏瓊脂ISPMedium2(YeastExtractMaltExtractAgar)250g/瓶用于鏈霉菌屬的培養(yǎng)鑒定

大腸桿菌顯色培養(yǎng)基 1000ml 用于快速、準(zhǔn)確檢測(cè)大腸桿菌,培
新生霉素/*5

Silicatebacteriamedium(withoutAgar)

醋酸鹽瓊脂 Acetate Agar 250 用于細(xì)菌醋酸鹽試驗(yàn)

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SorbitolMaconkeyAgarBase
無脊椎動(dòng)物種屬鑒定 PCR Mix100 次保存氣單胞菌培養(yǎng)基添加劑5支每支添加劑加入氣單胞菌培養(yǎng)基基礎(chǔ)

50190 胰蛋白胨 BR 400g 酪蛋白*水解而成的胨,培養(yǎng)基原材料 incubation media 50190 胰蛋白胨 BR 400g 酪蛋白*水解而成的胨,培養(yǎng)基原材料

粉紅木霉 /

WagstsumaBloodAgarBase

MaltExtractAgar

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