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小鼠黑色素(MC)Elisa試劑盒技術(shù)參數(shù)

來源:上海博研生物工程研究中心   2013年09月11日 14:18  

小鼠黑色素(MC)操作步驟

1. 標(biāo)準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

32ng/L

5號標(biāo)準品

150μl的原倍標(biāo)準品加入150μl標(biāo)準品稀釋液

16ng/L

4號標(biāo)準品

150μl5號標(biāo)準品加入150μl標(biāo)準品稀釋液

8ng/L

3號標(biāo)準品

150μl4號標(biāo)準品加入150μl標(biāo)準品稀釋液

4ng/L

2號標(biāo)準品

150μl3號標(biāo)準品加入150μl標(biāo)準品稀釋液

2ng/L

1號標(biāo)準品

150μl2號標(biāo)準品加入150μl標(biāo)準品稀釋液

 

 

2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻

3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   

4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。 

7. 溫育:操作同3。

8. 洗滌:操作同5

9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

10. 終止:每孔加終止50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。

 

測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值) 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

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小鼠黑色素(MC)保存條件及有效期

1試劑盒保存:2-8。

2.有效期:6個月

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