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如果你在真核系統(tǒng)上開展生物學研究,那么你有很大的機會要培養(yǎng)細胞。作為實驗的原材料,細胞的狀態(tài)很重要。不過,如今的實驗室中有無數(shù)的細胞系,每一種都有其*的生長特性,研究人員如何才能確定細胞培養(yǎng)物是健康的?
各大廠商已開發(fā)出一系列工具來監(jiān)控細胞培養(yǎng)物。一些是專門的檢測,來監(jiān)控藥物篩選等應用中的細胞變化。當然,更多的是用于日常的細胞培養(yǎng)。在此,我們就來看看你有哪些選擇。
流式檢測
細胞健康并沒有一個定義。MilliporeSigma流式細胞應用的研發(fā)主管Kamala Tyagarajan認為,這個詞涵蓋了細胞的一切,包括細胞密度、倍增時間以及氧化應激和凋亡狀態(tài)。不過,zui直接的指標是細胞活力。
之前,細胞活力是利用*和臺盼藍來評估的。臺盼藍是一種無法透過細胞膜的染料,這意味著它會被健康細胞排斥,而只能進入細胞膜受損的細胞。研究人員將染料與細胞混合,并移液至*,在獲得細胞計數(shù)的同時評估多少是活的。這個過程可以自動化,比如Bio-Rad的TC20自動細胞計數(shù)器。不過,你也可以選擇放棄臺盼藍,而轉投流式細胞儀的懷抱。
比如,MilliporeSigma的Muse® Count & Viability Assay就使用了兩種熒光染料的混合物,一種可染色所有有核的細胞,另一種則染色無活力的細胞。通過在Muse細胞分析儀上分析染色的細胞,研究人員可獲得樣品中的細胞總數(shù)和活細胞數(shù)量。
據(jù)Tyagarajan介紹,MilliporeSigma為Muse細胞分析儀開發(fā)了超過25種檢測,其中有10種可評估細胞健康,同時還為其他流式細胞儀(如Guava easyCyte系統(tǒng))開發(fā)了其他檢測。這些檢測可監(jiān)控凋亡、氧化應激、線粒體健康以及細胞周期狀態(tài)。
Bio-Rad的CytoTrack™檢測也是基于流式細胞儀,可監(jiān)控細胞增殖。該公司細胞生物學的產(chǎn)品Chris Linnevers表示,CytoTrack根據(jù)特定染料的豐度來提供細胞增殖的量度。在CytoTrack檢測中,染料被上樣到細胞中,隨著細胞的分裂,每個細胞中的染料數(shù)量降至一半。通過流式細胞儀的分析,研究人員可計算細胞分裂了多少次。
成像檢測
許多公司,包括Bio-Rad、Essen Bioscience和GE Healthcare,也開發(fā)出成像平臺,能夠捕獲形態(tài)變化,從而監(jiān)控細胞培養(yǎng)物。
比如,Bio-Rad的ZOE™熒光細胞成像儀是一個臺式手動顯微鏡,將平板電腦那樣的界面與倒置顯微鏡和數(shù)字熒光成像能力融為一體。ZOE具有一個明視場和三個熒光通道,“是常規(guī)監(jiān)控細胞健康的好工具,特別是表達熒光蛋白的細胞”。即便如此,研究人員也可使用該公司的VivaFix™試劑,這種染料可與伯胺結合,利用活細胞和死細胞之間的染色強度來區(qū)分它們。
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